超低分子量蛋白电泳试剂盒(非变性)(货号:RTD6121)
● 产品组成:
组分货号
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组分
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名称
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规格
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贮存
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运输
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RTD6121-01
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组分1
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2×多肽电泳浓缩胶缓冲液
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15 ml
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4℃
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常温
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RTD6121-02
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组分2
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2×多肽电泳分离胶缓冲液
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30 ml
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4℃
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常温
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RTD6121-03
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组分3
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2×PAA溶液 超低浓缩胶用
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15 ml
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4℃
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常温
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RTD6121-04
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组分4
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2×PAA溶液 超低分离胶用
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30 ml
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4℃
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常温
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AP020P
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组分5
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10% APS(干粉)
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5 ml
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常温
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常温
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TA0761-01
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组分6
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TEMED
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0.5 ml
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常温
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常温
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CB020P
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组分7
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10×Tris-Tricine电泳缓冲液 (10×TT)
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500 ml(干粉)
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常温
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常温
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TP070
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组分8
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2×Tricine 上样缓冲液(非变性,非还原)
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1 ml
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-20℃
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常温
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RTD6202-02
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组分9
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FastBlue蛋白染色液
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500 ml
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常温
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常温
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● 产品简介:
本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳(多肽电泳)全套试剂,可以用来检测非变性条件下1-20 kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。具有以下特点:
1 配套试剂不含任何变性剂如SDS和还原剂如DTT或巯基乙醇,适用于非变性电泳。
注:凝胶和电泳缓冲液pH在8.3左右,非变性电泳适于检测等电点小于8.3的蛋白,等电点近似或大于8.3的碱性蛋白不适合检测。
2 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离1-5 kD多肽。
3 使用方便:配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝胶。
● 贮存和效期:
按照标签温度贮存;开封后有效期一年。
● 使用说明:
一. 10% APS配制:
10% APS配制-5 ml:将APS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
二. 制胶:
I 配制分离胶
1.按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
表一 (一块1 mm mini胶用量)*
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分离胶
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浓缩胶
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18%T /5 ml
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5%T /2 ml
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2×多肽电泳浓缩胶缓冲液
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/
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1 ml
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2×多肽电泳分离胶缓冲液
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2.5 ml
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/
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2×PAA溶液 超低浓缩胶用
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/
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1 ml
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2×PAA溶液 超低分离胶用
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2.5 ml
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/
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10%APS
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25-50 μl**
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20-30 μl
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TEMED
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2.5-5 μl
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2 μl
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注: * 如非必须,不要使用厚度1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。
表二 凝胶制备凝固时间表
环境温度
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20℃
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25℃
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分离胶配制
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浓缩胶配制
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分离胶配制
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浓缩胶配制
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分离胶配制量
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5 ml
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-
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5 ml
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-
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浓缩胶配制量
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-
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2 ml
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-
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2 ml
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10%APS
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50 μl
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20 μl
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25 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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2.5 μl
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2 μl
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凝固时间
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5-10 分钟
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20-30 分钟
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5-10 分钟
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20-30 分钟
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2.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层,使凝胶表面保持平整。
3.静置5-10分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的乙醇层,用滤纸将残留的乙醇吸去。
1.按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
2.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
3.静置20-30分钟待凝胶聚合
三. 电泳:
1. 10×Tris-Tricine缓冲液配制:
将10×Tris-Tricine缓冲液(10×TT)粉末(Cat No:CB020P)置于一干净的一升烧杯中,加入500ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TT缓冲液。
表三 1×TT缓冲液配制
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1×TT配制量 500 ml
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1×TT配制量 1000 ml
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10×TT
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50 ml
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100 ml
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超纯水
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450 ml
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900 ml
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注:伯乐Mini
III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TT缓冲液。
2. 样品处理:
待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(非变性,非还原)[Cat No:TP070]等体积混合,不要加热,上样。蛋白Marker选择非变性专用Marker,根据说明书使用。将电泳槽的内槽加满1×TT缓冲液,轻柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品(已经过处理)加入点样孔,稳压电泳(表四),至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。
表四 多肽电泳条件
恒电压
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150V
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起始电流
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60-75mA/板胶
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结束电流
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15-25mA/板胶
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电泳时间
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2.5-3小时
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四. 染色(使用组分9-FastBlue蛋白染色液):
4.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,蒸馏水漂洗一次;弃水,加入适量染色液(以刚
刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。
4.2 摇床上常温摇动10-15分钟至条带清晰;观察结果。