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超低分子量蛋白电泳试剂盒(变性电泳)

超低分子量蛋白电泳试剂盒(变性电泳)

产品编号:RTD6120

产品规格:10次

相关规格:
数量
价格 ¥1000

超低分子量蛋白电泳试剂盒(货号:RTD6120)

●     产品组成:

组分货号

组分

名称

规格

贮存

运输

RTD6120-01

组分1

2×多肽电泳浓缩胶缓冲液

15 ml

4

常温

RTD6120-02

组分2

2×多肽电泳分离胶缓冲液

30 ml

4

常温

RTD6120-03

组分3

2×PAA溶液 超低浓缩胶用

15 ml

4

常温

RTD6120-04

组分4

2×PAA溶液 超低分离胶用

30 ml

4

常温

AP020P

组分5

10% APS(干粉)

5 ml

常温

常温

TA0761-01

组分6

TEMED

0.5 ml

常温

常温

CB010P

组分7

10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)

500 ml(干粉)

常温

常温

TP050

组分8

2×Tricine 上样缓冲液(含还原剂)

1 ml

-20

常温

RTD6202-02

组分9

FastBlue蛋白染色液

500 ml

常温

常温

产品简介:

本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳(多肽电泳)全套试剂,可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。具有以下特点:

1 适用范围广:2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS,适用于多肽的变性和非变性电泳。

2 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离1-5kD多肽。

3 稳定性高:凝胶缓冲液pH为中性,存放时间长。

4 使用方便:配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝胶。

贮存和效期:

按照标签温度贮存;开封后有效期一年。

使用说明:

. 10% APS配制:

10% APS配制-5 ml将APS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

. 制胶:

I 配制分离胶

1.按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

表一  (一块1 mm mini胶用量)*

 

分离胶

浓缩胶

 

18T /5 ml

5T /2 ml

2×多肽电泳浓缩胶缓冲液

/

1 ml

2×多肽电泳分离胶缓冲液

2.5 ml

/

2×PAA溶液 超低浓缩胶用

/

1 ml

2×PAA溶液 超低分离胶用

2.5 ml

/

10APS

25-50 μl**

20-30 μl

TEMED

2.5-5 μl

2 μl

注: * 如非必须,不要使用厚度1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。

表二 超低凝胶制备凝固时间表

环境温度

20

25

 

分离胶配制

浓缩胶配制

分离胶配制

浓缩胶配制

分离胶配制量

5 ml

-

5 ml

-

浓缩胶配制量

-

2 ml

-

2 ml

10%APS

50 μl

20 μl

25 μl

20 μl

TEMED

5 μl

2 μl

2.5 μl

2 μl

凝固时间

5-10 分钟

20-30 分钟

5-10 分钟

20-30 分钟

2.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层,使凝胶表面保持平整。

3.静置5-10分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制浓缩胶

去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。

1.按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

2.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

3.静置20-30分钟待凝胶聚合

. 电泳:

1. 10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制:

将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat NoCB010P)置于一干净的一升烧杯中,加入500ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TTS缓冲液。

表三 1×TTS缓冲液配制

 

1×TTS配制量 500 ml

1×TTS配制量 1000 ml

10×TTS

50 ml

100 ml

超纯水

450 ml

900 ml

注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。

2. 样品处理:

  待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液[Cat NoTP050]等体积混合,75℃处理5-10分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液,根据说明书上样(预染Marker不能加热处理,非预染Marker上样前一般要75℃处理5-10分钟)。

将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液,轻柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品(已经过处理)加入点样孔,稳压电泳(表四),至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

表四 多肽电泳条件

恒电压

150V

起始电流

60-75mA/板胶

结束电流

15-25mA/板胶

电泳时间

2.5-3小时

四. 染色(使用组分9-FastBlue蛋白染色液):

用前必读:

1 使用前如发现瓶中有少许沉淀,请混匀后使用。

2以下“使用方法”是针对0.75mm1.0 mm厚度,10×10cm凝胶染色程序。

使用方法:

1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。

2. 摇床上常温摇动10-15分钟。

3. 观察结果。

注意事项:

1. 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝胶,如果使用更大面积或更厚的凝胶,请加入更多的染色液并延长染色的时间。

2. 常规染色所需的漂洗,固定,脱色步骤都无必要。

3. 本染色液可以重复利用1-2次,敏感性会有轻微下降,请延长染色时间。

4. 本染色液有轻微腐蚀性,请带手套操作。使用后,请盖好瓶盖,常温密封保存。

 缓冲液配方:

1. 10x Tricine-Tris-SDS缓冲液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

组分浓度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

Tris base 121.1 g

Tricine    179.2 g

SDS         10 g

ddH2O      to1 L 

Do not adjust the pH (~pH 8.3)


2. 2×Tricine蛋白样品加样缓冲液(10ml)  (Cat No:TP050)

组分浓度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

1ml 1MTris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g  SDS

0.31gDTT

2mg 考马斯亮蓝G-250

用灭菌ddH2O定容至10ml

混匀分装-20℃贮存备用


多肽电泳配套试剂

名称

货号

规格

超低分子量蛋白电泳试剂盒

RTD6120

10

超低分子量蛋白Marker I3.3-20.1 kD

RTD6101

10次(100 μl

超低分子量蛋白Marker III3.4-100 kD

RTD6125

10次(50 μl

彩虹预染超低分子量蛋白Marker1.2-45 kD

RTD6110

10 50 μl

彩虹预染超低分子量蛋白Marker II3-40 kD

RTD6145-01

10 50 μl

40% PAA19:1

AC1914-01

100ml

40% PAA29:1

AC2914-01

100ml

多肽电泳凝胶缓冲液

GB010-100ml

100ml

2×Tricine 上样缓冲液(变性,还原)

TP050

10×1ml

FastBlue蛋白染色液

RTD6202

500ml

乙二醇(电泳级)

EA0582-02

100 ml

10×Tris-Tricine-SDS缓冲液(变性电泳,粉末型)

CB010P

500 ml

10×阳极缓冲液 (多肽电泳用

AB080

250 ml

10×阴极缓冲液(多肽电泳用)

CB010

100 ml

 


使用该产品发表部分文章列表:

1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer for Purification of ε-Poly-L-Lysine.

ProductRTD6120 超低分子量蛋白电泳试剂盒

Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.

Journal: Appl Biochem Biotechnol. May 20 2017.

InstitutionEast ChinaUniversity of Science and Technology

Paper link https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3

 

2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. 

ProductRTD6120 超低分子量蛋白电泳试剂盒;RTD6110 彩虹预染超低分子量蛋白Marker

Author: Feng Qin,Xiangmin Zhang 

Journal: Analytical Methods 2021,13,2804

Institution Department of Chemistry, Fudan University,

Paper linkhttps://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/

 

 


 
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