快速抗体剥离液（免封闭）           Ver.760571-1.0

● 产品简介：

抗体剥离液也称为抗体清除液、印迹膜再生液、抗体洗脱液、Western一抗二抗去除液等，可以高效去除印迹膜上的一抗和二抗，而吸附在膜上的抗原基本不受影响，用于Western中转移了蛋白膜的重复利用，可以一膜多敷，即一张膜做多次Western印迹实验。使用本试剂只需10-20分钟即可实现蛋白膜的重复使用，然后可以进行Western的后续操作。

该产品具有以下几个优点：

1.可用于昂贵或珍稀样本的多次杂交；

2.有利于用不同抗体分析单次印迹上的不同蛋白，比如磷酸化蛋白的检测；

3.有利于对异常结果进行重新分析或确认；

4.有利于纠正孵错的抗体；

5.剥离抗体后可以不用封闭，直接孵育后续抗体，节约试剂成本，节约时间。

● 贮存、效期及运输：

   4℃贮存；有效期1年；常温运输。

● 用前必读：

1. 理想的抗体剥离液应该是洗脱抗体的同时，不洗脱膜上结合的蛋白或者不改变抗原的结合性质，但是目前没有一种剥离液可以做到只洗脱抗体，而完全不洗脱膜上结合的抗原；也没有一种剥离液可以适用于所有不同亲和度的抗原抗体复合物。剥离液洗脱能力太强，抗原容易被洗脱；太弱，则抗体残留太高。因此，从免疫印迹膜上去除抗体的方案仅能用于定性用途，因为在每个抗体剥离循环中，或多或少都将洗去少量膜上的蛋白。

2. PVDF膜比NC膜更坚韧，因此优先推荐使用PVDF膜用于涉及抗体剥离的实验。

3. 有文献指出转膜后干燥的PVDF膜或NC膜（未结合抗体），可改善蛋白质与膜的结合，特别推荐用于涉及多次抗体剥离的实验。然而，在抗体检测之前，必须使用甲醇将干燥的PVDF膜润湿或用1×TBST将干燥的NC膜润湿。已经结合有抗体的膜，决不能使得膜干燥，否则抗体分子将与膜结合紧密，很难剥离。因此，在做完一轮ECL发光检测实验后，用剥离液清除掉膜上的抗体，推荐将膜浸泡于1×TBS（非1×TBST）中4度保存。

4. 检测时，优先检测低丰度抗原，即先孵育条带较弱（表达较低）的蛋白，再孵育条带明显（表达较高）的蛋白，最后再孵育内参。

5. 如条件允许，下一轮的抗体杂交实验选择种属来源不同的一抗（对应不同种属的二抗），减少检测的交叉反应。

6. 该剥离液仅适用于ECL发光检测的膜上抗体清除，不适合于膜上直接显色（DAB，BCIP/NBT等）后抗体的清除，也不适合荧光检测后抗体的清除。

● 使用说明：

1. 在完成ECL化学发光检测后，印迹膜膜在1×TBST中震荡漂洗5分钟，重复漂洗3次。

2. 弃溶液，加入适量的抗体剥离液，根据下表操作。孵育温度和时间会明显影响抗体去除效果，参照下表调整。

3. 弃剥离液，加入足量1×TBST，在摇床上漂洗3次，每次5分钟，把剥离液彻底漂洗干净。

注：残余的剥离液会影响印迹膜后续抗原抗体的的结合，确保要漂洗干净；由于剥离液中含有剥离下来的抗体，不建议重复使用剥离液。

4. 剥离效果验证（可选）：

4.1 直接显影法：漂洗后的已剥离转印膜直接孵育ECL发光液，曝光5-10分钟，膜上看不到发光条带表明二抗清除得比较干净。如果膜上能看到条带，重复步骤2-3。此方法的局限性是只能验证已结合二抗的一抗剥离效果，不能检测未结合二抗的残余一抗的剥离效果。

4.2 功能验证法：漂洗后的已剥离转印膜，常温孵育二抗一小时，1×TBST漂洗三次，ECL发光检测，无原目的蛋白的特异性条带，表明抗体剥离比较干净；如果原目的条带位置有清晰的信号残余，说明膜上有残余的一抗二抗复合物，重复步骤2-3。

5．处理完后的印迹膜无需封闭，可直接进行下一次Western Blot实验。

● 实验示例：