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Taq plus DNA聚合酶

Taq plus DNA聚合酶

产品编号:RTS3102-03

产品规格:5×500U

相关规格:
数量
价格 ¥900

Taq plus DNA Polymerase

高效率、高保真DNA聚合酶

目录号

浓度

包装

RTS3102-02

5 U/μl

500 U 100μl

RTS3102-03

5 U/μl

5×500 U5×100μl

贮存

  -20℃保存一年。

产品简介

Taq plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成,具有扩增效率高,错配率低的特点。与Taq DNA聚合酶相比,Taq plus DNA聚合酶具有扩增长度长,保真性好的优点;与pfu DNA聚合酶相比,具有扩增速度快,反应效率高的优点。此酶具有比Taq DNA聚合酶约3倍的PCR可信度。该酶的大多数PCR产物3’端带碱基A,可以通过TA克隆法进行克隆。

产品组成(RTS3102-02

Taq plus DNA Polymerase(5U/μl)                   100μl

10×Taq plus PCR buffer(含Mg2)                    1ml

活性定义

1单位(U) Taq plus DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

酶贮存缓冲液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

适用范围

适用于要求保真性和高效率的PCR反应,大多数情况下可以替代Taq DNA 聚合酶。

使用说明:

1. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:

成分

体积

终浓度

Template

0.1-1μg

as you wish

Primer 110 μM

1μl

200nM

Primer 210 μM

1μl

200nM

10×Taq plus PCR buffer

5μl

dNTP Mixture(10 mM)

1μl

200μM each

Taq plus(5 U/μl)

0.5-1μl

2.5-5U

ddH2O

up to 50μl

-

2. 混匀后,离心快甩将反应液收集到管底。

3. PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。


4. PCR仪上执行以下程序:

三步法:

步骤

温度

时间

循环数

初始变性

94

1-5 min

1

变性

94

30 sec

25-40*

退火

Tm-5*

30 sec

延伸

72

1 min/kb

最后延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。


 

      常见问题:

Q1Taq plus DNA polymerase能扩增多长片段?

A1:对简单模板(如λ噬菌体做模板),可以扩增  kb片段;对复杂模板(如基因组DNA),可以扩增  kb片段。

 

Q2Taq plus DNA polymerase保真性怎样?

A2Taq plus含有3-5校对活性的聚合酶,有校对功能。保真性为普通Taq酶的3倍。

 

Q3:使用Taq plus DNA polymerase的扩增产物是否可以进行TA克隆?

A3:由于使用Taq plus得到的PCR产物大多数带有A,可以进行TA克隆。

 

Q4Taq plus DNA polymerase可以扩增高GC含量片段吗?

A6Taq plus可以扩增高GC含量片段,建议使用Taq plus配合2×GC buffer使用,而不建议使用10×Taq plus PCR buffer


Taq Plus DNA Polymerase扩增效果

M: DNA Marker III 

1: Rice PEPCase 8.6kb  

2: Rice PEPCase 5.2kb  

3: Rice PEPCase 3.2kb 

4: pCMV-Myc 3kb  

5: pCMV-Myc 2kb




 
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