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高纯质粒小提试剂盒

高纯质粒小提试剂盒

产品编号:RTP2101-02

产品规格:100次

相关规格:
数量
价格 ¥300

高纯质粒小提试剂盒目录号:RTP2101



试剂盒内容及保存:

试剂盒组成

RTP2101-02 100次)

RTP2101-03 200次)

贮存

RNase A

300 μl

600 μl

-20

Lysis Dye

600μl

2×600μl

室温

溶液P1

30 ml

60 ml

室温 (加入RNase A2-8保存)

溶液P2

30 ml

60 ml

室温

溶液P3

40 ml

80 ml

室温

去蛋白液PD

60 ml

120 ml

室温

漂洗液PW

25 ml

2×25 ml

室温

洗脱缓冲液EB

15 ml

15 ml

室温

质粒吸附柱CP

100

2×100

室温

收集管(2 ml

100

2×100

室温

说明书

1

1

 

 

储存条件和效期:


本试剂盒在室温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2–8℃2–8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNase A -20℃可稳定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2–8℃保存,可稳定保存半年。

 

产品简介及使用说明:

本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性,可以从15ml大肠杆菌LB培养液中快速提取320μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而,对质粒纯度要求更高的转染实验(要求无内毒素),此试剂盒不能达到要求。另外,尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒(>10kb),但我们不推荐使用。如果一定要使用,请参考以下方法:加大菌体使用量(使用5–10 ml过夜培养物),同时按照比例增加P1P2P3的用量;洗脱缓冲液应在70℃预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率,其它步骤相同。

 

产品特点:

1使用了Lysis Dye,菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验,所以我们增加了Lysis Dye(一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂)来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后,Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色;加入P2后,Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色,裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清,如果红色非常均一,表明裂解充分;在完全裂解的体系中加入P3混匀后,体系立即变为黄色,任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。

2 增加了去蛋白液PD,能更加彻底地去除蛋白污染,得到纯度更高的质粒。

准备工作:

1 将试剂盒附带的RNase A全部加入到溶液P1中(如15ml P1中加入150μl RNase A),混匀后4贮存。

2 按照标签所示在漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。

3 每次使用前请检查溶液P2,溶液P3和去蛋白液PD是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37温浴至沉淀溶解后再使用。

 

使用Lysis Dye的标准操作步骤:

如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.   1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,10,000g 离心1分钟,尽量吸除上清。

:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。

2.   向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1请先检查是否已加入RNaseA)和5μl Lysis Dye,使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀,此时溶液为浑浊的红色。


注:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。

3.   加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解,此时溶液变为澄清的红色。


温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间绝对不应超过5分钟 ,以免质粒受到破坏;红色溶液应该透明均一,如有浑浊红色颗粒,表明裂解不充分,会大大降低质粒提取效率。

4.   加入350 μl溶液P3,立即温和地上下翻转,充分混匀,混匀充分的标志是溶液完全呈透明的黄色,如有可见红色,说明混匀不彻底。10,000g 离心10分钟。

注:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。


左侧未完全混匀,有红色;右侧完全混匀,呈均匀黄色

5.  小心地将上清转移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中)10,000g离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。

6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD10,000g离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。

7.  向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW请先检查是否已加入无水乙醇),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。

8. 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液。

9.  将吸附柱CP置于重新放回收集管中,10,000g 离心2分钟。

:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,绝对不可省略,因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验(酶切,PCR等)。

10. 将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,10,000g 离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中,-20保存。

注:● 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中,再次离心收集。

洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。

洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低

洗脱效率。

不使用Lysis Dye的标准操作步骤:

如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.   1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,10,000 g离心1分钟,尽量吸除上清。

菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。

2.   向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。

3.  加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解。

注:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA所用时间绝对不应超过5分钟,以免质粒受到破坏。

4.   加入350 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6–8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。10,000g 离心10分钟。

注:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

5.  小心地将上清转移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中)10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。

6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD10,000g离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。

7.   向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW请先检查是否已加入无水乙醇),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。

7      向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液。

8.  将吸附柱CP置于收集管中,10,000g 离心2分钟。

:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,绝对不可省略,因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验(酶切,PCR等)。

9.   将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,10,000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中,-20保存。

注:● 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中,再次离心收集。

洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。

洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。

质粒提取试剂盒 RTP2101/RTP2102发表文章

1.  A weird DNA band in PCR and its cause.

Author: Chang Shenghe, Sun Wei, Zhou Zhaoxi, Li Jingyang, Dai Minjie, Shu Haiyan

Product: RTP2102 普通质粒小提试剂盒

Journal: Journal of Plant Science & Molecular Breeding  Volume 5 Article 2 2016

InstitutionHaikou experimental station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences

Paper linkhttps://doi.org/10.7243/2050-2389-5-2

 

2. [2017 IF=4.076] Application of Real-Time Quantitative PCR to Detect Mink Circovirus in Naturally and Experimentally Infected Minks.

Author: Xingyang Cui, Yunjia Shi, Lili Zhao, Shanshan Gu, Chengwei Wei, Yan Yang,Shanshan Wen, Hongyan Chen and Junwei Ge

Product: RTP2102 普通质粒小提试剂盒

Journal: Fronties in Microbiology May 2018 | Volume 9 | Article 937

InstitutionCollege of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University

Paper linkhttps://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29867846

 

3. [2018 IF=8.063] ATF4 destabilizes RET through nonclassical GRP78 inhibition to enhance chemosensitivity to bortezomib in human osteosarcoma

Author: Jie Luo, Yuanzheng Xia, Yong Yin, Jun Luo, Mingming Liu, Hao Zhang, Chao Zhang, Yucheng Zhao, Lei Yang, and Lingyi Kong

Product: RTP2101 高纯质粒小提试剂盒

Journal: Theranostics 2019, Vol. 9, Issue 21

InstitutionSchool of Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University

Paper linkhttps://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31534554

 

4. [2020 IF=1.336] Isopentenyl Diphosphate Isomerase (IPI) Gene Silencing Negatively Afects Patchouli Alcohol Biosynthesis in Pogostemon cablin

Author: Wuping Yan,Yuzhang Yang,Yougen Wu,Jing Yu,Junfeng Zhang, Dongmei Yang, Zeeshan Ul Haq Muhammad

Product: RTP2102 普通质粒小提试剂盒

Journal: Plant Molecular Biology Reporter Published 27 January 2021

InstitutionCollege of Horticulture, Hainan University

Paper linkhttps://link.springer.com/article/10.1007/s11105-020-01269-0

 

5. [2022 IF=2] Genomic characterization and phylogenetic analysis of Aleutian mink disease virus identified in a sudden death mink case

Author: Xingyang Cui, Yan Yang, Fang Wang, Jilong Luo, Ping Zhang, Hongyan Chen, Lili Zhao, Junwei Ge

Product: RTP2102 普通质粒小提试剂盒

Journal: Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. Vo101, October 2023, 102052

InstitutionCollege of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University

Paper linkhttps://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0147957123001108

 


 
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