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2×pfu PCR MasterMix 不含染料

2×pfu PCR MasterMix 不含染料

产品编号:RTH3103-02

产品规格:500μl

相关规格:
数量
价格 ¥100

2×pfu PCR MasterMix

 产品包装:

 

 

目录号

包装

2×pfu PCR MasterMix(不含染料)

RTH3103-02

500μl

RTH3103-03

5×500μl

2×pfu PCR MasterMix(含染料)

RTH3104-02

500μl

RTH3104-03

5×500μl

注:以50μl PCR反应体系为例,每次使用25μl 2×MasterMix500μl可做20 50μl PCR反应。

 储存条件: -20℃可长期保存;4℃稳定贮存3个月。经常使用时,一旦融化后请4℃贮存,尽量避免反复冻融。

 产品简介:

本产品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通过平滑末端克隆法进行克隆。

 质量控制:

以λ DNA为模板,可以很好扩增5kb的DNA片段;以水稻基因组为模板,可以很好扩增3.2kb的DNA片段。

●  使用说明:

1. 冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后Minispin将溶液收集到管底。

2. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:

 

50μl反应体系

终浓度

2×MasterMix

25μl

上游引物 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

下游引物 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

模板

× μl

10pg-1μg

补至50μl

 

3. 快甩离心将反应液收集到管底。

4. PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。

5. PCR仪上执行以下程序:

步骤

温度

时间

循环数

初始变性

94

5 min

1

变性

94

30 sec

25-40*

退火

Tm-5*

30 sec

延伸

72

0.5kb/min

最后延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

6. 电泳检测。

 注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上样;不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。



1% agarose gel,RealSafe Red stain
lane 1: 1800bp,Rice fragement
lane 2: 1000bp, plasmid fragement
lane 3: 500bp, plasmid fragement


 
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