RealPAGE^®彩色PAGE凝胶快速制备试剂盒（两步法）

●  货品内容：

● 运输、贮存及效期：

本产品常温运输；4-8℃贮存，其中配制后的改良型促凝剂贮存于-20℃；有效期一年。

● 产品特点：

快速制备凝胶：短时间即可灌制多块凝胶，无需计算所需溶液量，无需稀释；

彩色上层胶：可制备五种颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供便利；

避免异味：无需使用 TEMED，环境安全友好；

凝胶高稳定性：中性pH凝胶,有效提高凝胶稳定性,密封条件下，凝胶可以四度贮存6个月。

兼容性广：制胶溶液中不含SDS，可用于非变性电泳（Native-PAGE）。

● 产品简介：

该产品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理，采用上层胶和下层胶的预混配方，只需加入改良型促凝剂，可在15-30分钟内配制得到高质量的聚丙烯酰胺凝胶，可用于变性和非变性蛋白凝胶电泳，适用于Tris-甘氨酸电泳体系（Laemmli体系）。本产品可以配制6%（黄色上层胶）、7.5%（绿色上层胶）、10%（蓝色上层胶）、12.5%（红色上层胶）和15%（紫色上层胶）的分离胶浓度，所配的上层胶带有颜色 (黄色、绿色、蓝色、红色或紫色 )，点样孔清晰易辨，方便点样，可以满足绝大多数蛋白电泳需求。

本产品配套提供改良型促凝剂 ，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。为方便操作，已开盖使用中的改良型促凝剂，可置于 4℃保存至少三个月，-20℃保存一年。

本试剂盒大约可以配制60-125块常规大小（8×10 cm）的PAGE凝胶，具体数量根据凝胶厚度决定：0.75 mm厚度凝胶可以配制125块胶，1.0 mm厚度凝胶可以配制至少90块胶，1.5 mm厚度凝胶可以配制至少60块胶。

● 使用说明：

一. 制胶前的准备：

1.1     即用型改良型促凝剂配制：

试剂盒提供的改良型促凝剂为干粉，第一次使用前加入10 ml超纯水，彻底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝剂置于4℃备用，长期不用建议-20℃贮存。

1.2     推荐操作：

实验前半小时，取出试剂盒所有组份，常温静置半小时使溶液恢复到常温后轻柔混匀，可以有效降低制胶时产生气泡的可能性。

二. 凝胶配制(以一块0.75/1.0/1.5 mm厚度的8×10 cm胶为例)：

2.1 下层胶制备：

2.1.1 根据表一配制下层胶：

2.1.2 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，混匀；

2.1.3混合溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀；

注： 加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。

2.1.4 将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离为约1.5 cm或距离梳齿下沿距离为约0.5 cm即可；

注：此溶液为过量，请勿全部注入；可留少许于制胶杯中， 便于判断凝胶状态。

2.1.5 封闭：沿玻璃板缓慢加入适量超纯水或醇（无水乙醇或异丙醇）覆盖于下层胶之上，待下层胶凝固后（5-15 min），倒去上层水或醇，可用滤纸将残余溶液吸尽；

注：当水（醇）和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝固；凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。下层胶25℃ ~8分钟可以聚合；18℃ ~15分钟可以聚合。

2.2 上层胶配制(以一块0.75/1.0/1.5 mm厚度的8×10cm胶为例)：

2.2.1 根据表二配制上层胶：

2.2.2 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，混匀；

注：由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀彩色上层胶缓冲液。

2.2.3向混合溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀；

注： 加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。

2.2.4将混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳齿，待上层胶凝固后 （约15-40 min），拔去梳齿即可用于电泳。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。上层胶25℃ ~15分钟可以聚合；18℃ ~25分钟可以聚合。

附：温度与凝胶时间参考表

三. 电泳：

3.1 变性电泳：

3.2 非变性电泳：

非变性电泳必看：该凝胶体系pH大约8左右，适用于等电点pI小于8的蛋白电泳分离，pI越远离8，带的负电荷越多，分离就更容易；等电点接近8或者高于8的蛋白不适合用该系统进行非变性电泳。

四. 凝胶染色或转膜：

4.1 凝胶染色可以选择FastBlue蛋白快速染色液(货号：RTD6202)， 可以在30分钟内完成染色和脱色，也可以选择常规法考马斯亮蓝蛋白染色液（货号：RTD6203）。

4.2 转膜缓冲液可以使用湿转法或半干转方法转膜。湿转法可以使用经典Tris-甘氨酸转膜缓冲液（货号：TB1040）或者使用10×RealBlot快速转膜液（货号：RT5020）。半干转转膜可以使用5×RealBlot快速半干转转膜缓冲液（货号：RT5030）。

五. 凝胶浓度选择参考：