10×RealBlot 免冰浴快速湿转转膜液
10×RealBlot Rapid Tank Transfer buffer（ice-free）
Ver.760174-2.0
● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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RT5040
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10×RealBlo免冰浴快速湿转转膜液
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500 ml
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● 产品简介：
10×RealBlo免冰浴快速湿转转膜液使用独特配方，能25-40分钟内高效快速地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。产品特点：
绿色环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。
快速方便：40 min内结束转膜，可以不使用冰浴。
兼容广泛：快速转膜液能兼容Laemmli胶（Tris-甘氨酸胶），Bis-Tris胶等多种凝胶。
转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。
● 贮存、效期及运输：
4-8℃贮存；有效期一年；常温运输。
● 使用说明：
1. 按照下表配制1×快速转膜液
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加入顺序
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组份
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1×快速转膜液配制量 1000 ml
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1
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10×快速转膜液
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100 ml
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2
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超纯水
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800 ml
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3
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无水乙醇
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100 ml
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2. 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。
3. PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，随后浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟；NC膜无需处理，直接浸泡在转膜缓冲液中。
4. 将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
5. 做好转印所需的三明治结构， 从负极（黑色面） 到正极（红色面或白色面） 顺序为海绵、滤纸、 凝胶、印迹膜、滤纸、海绵，然后转移至转印槽中，加入快速转膜缓冲液。
注1：要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
注2：三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。
6.推荐使用恒流转移：
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凝胶厚度
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恒流
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凝胶浓度
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推荐转膜时间
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1.0 mm
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400
mA
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6%/8%
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~25 min
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10%/12%/15%
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~35 min
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4-15%
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~30 min
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4-20%
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~40 min
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1.5 mm
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如果凝胶厚度1.5 mm，延长转膜时间5-10 min
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实验示例：
电泳：RealPAGE类梯度PAGE凝胶快速电泳试剂盒(RTD6165)
恒压200 V 55-28 mA 30 min（图1）
转膜：10×RealBlot 免冰浴快速湿转转膜液（RT5040）1×转膜缓冲液加10%乙醇;0.45μm PVDF膜
恒流400 mA 40 min 69-72 V 冰浴搅拌转膜（图3）
转膜后凝胶用FastBlue快速染色液(RTD6202)检测凝胶转膜后蛋白残余（图2）
封闭：5分钟快速封闭液 RT 5 min
抗体：一抗 线粒体氧化磷酸化抗体Cocktail RT 60 min；二抗：Jackson 羊抗兔IgG-HRP 1：5000 60 min
样品1：K562-RIPA-TP提取 28-23 样品2：K562 线粒体样品CY 28-23 ；
样品3：K562 线粒体样品 28-26 样品4：小鼠肝脏BN-M 28-25
样品处理：5×双色蛋白上样缓冲液 (变性，还原）（PL090），95度 5 min
ECL发光检测（图4）