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Western无蛋白快速封闭液

Western无蛋白快速封闭液

产品编号:PF1070-500ml

产品规格:500ml

相关规格:
数量
价格 ¥150

Western无蛋白快速封闭液

Protein Free Rapid Blocking Buffer for WB

产品组成:

货号

名称

规格

保存条件

PF1070-100ml

Western无蛋白快速封闭液

100 ml

2-8

PF1070-500ml

Western无蛋白快速封闭液

500 ml

2-8

说明书

一份

产品简介:

本产品专为快速高效封闭Western Blot 转印膜而设计,采用无蛋白配方,避免抗体与封闭剂的非特异结合,最大程度地降低了背景。同时,本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素,对磷酸化特异抗体及生物素检测也不会产生干扰。本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合,因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,大大提高了抗体检测灵敏度。实验表明,本封闭剂对许多抗体都有不同程度的信号增强作用。然而这种信号增强作用因抗体而异,对某一特定抗体,并不一定具有确定的信号增强作用。

注意: 没有任何一种封闭剂能适合所有抗原和抗体的检测系统。如出现本试剂不适合的抗体,请替换使用其它种类的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等。

贮存:

  2-8贮存,有效期一年。

注意事项:

1. 快速高效:10-60 min内完成封闭;只结合封闭转印膜而不结合蛋白,因此不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,与传统的脱脂奶粉和BSA 封闭相比信噪比更高;

2. 方便快捷:无需稀释,即取即用;

3. 性能可靠:无蛋白配方,与抗体无交叉反应;

4. 应用范围广:无磷酸化蛋白,无生物素,尤其适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统;

5. 节省抗体:使用本封闭剂后,所需的最适抗体浓度低于常规使用浓度,可大大节省抗体使用量。

6. 与PVDF膜相比,NC膜需要更长时间的封闭。

使用说明:

1. 本产品无需稀释,开盖即用。

2. 完成转膜后,使用TBST漂洗转印膜3次,每次5分钟;


3. 将转印膜放入到杂交孵育盒中,加入10-20 ml 无蛋白快速封闭液完全覆盖转印膜,置于摇床轻轻摇动,参考下表确定封闭时间:

膜类型

推荐封闭时间

反应温度

PVDF

10-20分钟

常温 25

NC

40-60 分钟

常温25

注意:使用本产品,PVDF膜和NC膜使用推荐封闭时间,经多种抗体的测试封闭效果显著优于常规的BSA封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体,可以尝试延长封闭时间。如有特殊需要,也可4℃封闭过夜。

4.  封闭结束后弃去封闭液,进行Western Blot后续操作。

● 实验示例:


Jurkat细胞总蛋白GAPDH检测

电泳条件:200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min

转膜条件:NC膜,1×RealBlot快速转膜液(Cat:RT5020)

恒流400 mA 35 min 65-59 V

封闭:无蛋白封闭液(Cat:PF1070) RT 60 min

一抗:兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 过夜4℃孵育

二抗:羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000  RT 60min

ECL发光:RealECL发光液(Cat:EC2520 ) 10秒曝光



植物叶绿体LHCa3检测

Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS Electrophorosis(RTD6148)

Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)

               350 mA blotting to NC membrane for 30 min.

Blocking: 无蛋白封闭液(Cat:PF1070) RT  for 20 min;

BSA at RT for 1 h.

Primary antibody: Lhca3(Cat:RGL2080) 1:2000 dilution at RT for 1h

Secondary antibody: 1:5000 dilution using Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)

                Detection: using BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min



 
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