10% Digitonin

● 产品简介

Digitonin中文名称为洋地黄皂苷/毛地黄皂，分子式C₅₆H₉₂O₂₉，MW1229.33，CAS：11024-24-1。常用于线粒体膜蛋白复合物的溶解。

10% Digitonin为10%水溶液，使用时根据需要稀释后使用。

● 贮存、效期和运输：

-20℃贮存；一年有效；湿冰运输。

● 使用方法：

1.线粒体蛋白BN非变性样品处理（BN- PAGE）：

1.1 初始2×10⁷细胞分离得到的线粒体沉淀中建议使用50 μl膜蛋白重悬液（BN电泳用）（货号:PN1020）重悬线粒体沉淀；

1.2 BCA方法测定蛋白浓度（货号：RTP7102）；

1.3 用膜蛋白重悬液（BN电泳用）（货号：PN1020）调整蛋白浓度为1 μg/μl，按需分装，每管50 μl，-80℃保存待用；

1.4 取一管50 μl样品，溶化混匀后加入2.5-5 μl 10% Digitonin，轻柔重悬沉淀，尽量不产生气泡，冰浴10分钟；

1.5 4℃ 16000 g 15分钟，取上清至一干净1.5 ml离心管中即为增溶后线粒体蛋白溶液（小心不要吸取沉淀），此时得到的线粒体蛋白浓度为1 μg/μl（0.1%），其中去垢剂Digitonin终浓度为0.5-1%；

注：线粒体膜蛋白的增溶过程中，蛋白和去垢剂的含量比例极其严格，推荐蛋白含量:去垢剂DDM含量=1:10（质量比例），该比例已经测试可以很好溶解出线粒体氧化磷酸化五大复合物。然而，线粒体超复合物（SC）的溶解建议用Digitonin，推荐蛋白含量:去垢剂Digitonin含量=1:5-1:10（质量比例）。

1.6 线粒体蛋白溶液中加入等体积2×膜蛋白A型上样缓冲液（配套膜蛋白增溶液A使用）（货号：PL131），此时蛋白浓度为0.5 μg/μl，使用BN凝胶电泳（货号：RTD6139，RTD6140），每个泳道上样5-10 μg。