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RTD6130 非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
 产品货号: RTD6130
 产品名称: RTD6130 非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
 产品价格/规格: 50次 300元
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 更新时间: 2022-01-18
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    AP5015 10×酸性蛋白Native PAGE转膜缓冲液

    RTD6112 高分子量非变性电泳蛋白Marker(66-669 kD)

      

    非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒(货号:RTD6130

    Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

    产品组成:

    货号

    名称

    规格

    保存条件

    AC2913-01

    30%PAA(29:1)

    100 ml

    4

    RTD6130-02

    4×分离胶缓冲液 pH8.8

    100 ml

    RT

    RTD6130-03

    4×浓缩胶缓冲液 pH6.8

    30 ml

    RT

    AP020P

    APS(干粉)

    0.5 g

    RT

    TA0761-01

    TEMED

    0.5 ml

    4,避光

    PL111

    5×非变性非还原蛋白上样缓冲液

    1 ml

    -20

    TG130P

    5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(干粉)

    1L

    RT

    产品简介:

    本公司提供的非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制30-50块常规大小的非变性PAGE胶。

    特别说明:由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统,分离胶pH为8.8,因此要求待分离的蛋白等电点pI≤7.0,这样蛋白在凝胶系统内带负电荷,在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI>7.0,请选择碱性电泳凝胶系统分离(货号RTD6131)。

    使用说明:

    配制分离胶(各试剂使用量请参考表二)

    根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度(表一),再按照下面的分离胶配方表(表二)配制非变性PAGE的分离胶(即下层胶)。

    表一 不同浓度的PAGE分离胶的最佳分离范围:

    SDS-PAGE分离胶浓度

    最佳分离范围

    6%

    50-150kD

    8%

    30-90kD

    10%

    20-80kD

    12%

    12-60kD

    15%

    10-40kD

    10% APS配制-5 ml

    将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

    制备分离胶步骤:

    1.根据下表,将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合;先后加入TEMED和10%APS,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡


    2.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,使凝胶表面保持平整。

    3.静置15-20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    浓缩胶制备:


    1.去除覆盖在分离胶上的水层。

    2.按照表一将不同成分在一个小烧杯或试管中混合;先后加入TEMED和10%过硫酸铵,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

    3.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

    4.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    5.静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    三 电泳:

    凝胶凝固好后,根据以下配方准备电泳缓冲液。

    5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(不含SDS)的配制-1 L:将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中,加入约900 ml水彻底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。

    在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样,电泳,一般是浓缩胶80V,分离胶120V恒压,等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后,结束电泳,染色或者进行下一步实验。


    实验示例



  • 使用该产品发表部分文章列表:

    1. [IF=6.95] A teleost interleukin-16 is implicated in peripheral blood leukocytes recruitment and anti-bacterial immunity.

    Author:Xue-peng Li*, Guan-yu Chen, Jian Zhang, Deng-lai Li, Ji-xing Feng.

    Journal: International Journal of Biological Macromolecules. 2021,Vol.187, 821-829.

    Institution School of Ocean, Yantai University, Yantai, China

    Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.07.151


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