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SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
 产品货号: RTD6116
 产品名称: SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
 产品价格/规格: 50次 300元
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 更新时间: 2018-12-12
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  • SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒(货号:RTD6116)

    产品组成:

    货号

    名称

    规格

    保存条件

    AC2914-02

    40%PAA(29:1)

    100 ml

    4

    TS050-01

    4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8

    100 ml

    4

    TS030-01

    4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8

    50 ml

    4

    AP020P

    APS(干粉)

    0.5 g

    RT

    TA0761-01

    TEMED

    0.5ml

    4,避光

    PL080

    5×MonoColor蛋白上样缓冲液(含还原剂)

    1 ml

    -20

    TG120P

    5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(干粉)

    1 L

    RT

    说明书

    一份

    产品简介:

    本公司提供的SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。

    使用说明:

    一 配制分离胶(各试剂使用量请参考表二)

    根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度(表一),再按照下面的分离胶配方表(表二)配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。

    表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围:

    SDS-PAGE分离胶浓度

    最佳分离范围

    6%

    50-150kD

    8%

    30-90kD

    10%

    20-80kD

    12%

    12-60kD

    15%

    10-40kD

    配制分离胶前,根据以下配方准备10% APS:

    10% APS配制-5 ml将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10%APS。

    制备分离胶步骤:

    1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

    2.按照表二将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合;加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

    3.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,使凝胶表面保持平整。

    4.静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合

    表二 SDS-PAGE分离胶配方表

    组份

    不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml

     

     

     

     

    8                                   5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    2.7

    5.4

    8.1

    10.8

    4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1

    2

    3

    4

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2

    10                                 5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    2.45

    4.9

    7.35

    9.8

    4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2

    12                                 5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    2.2

    4.4

    6.6

    8.8

    4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1.5

    3

    4.5

    6

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2

    15                                 5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    1.825

    3.65

    5.475

    7.3

    4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1.875

    3.75

    5.625

    7.

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2


    二 浓缩胶制备:

    1.去除覆盖在分离胶上的水层。

    2.按照表三将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合;加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

    3.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

    4.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    5.静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。






    表三 SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表

    组份

    不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml

    2 ml

    4 ml

    5 ml

    10 ml

    H2O

    1.3

    2.6

    3.25

    6.5

    4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8

    0.5

    1

    1.25

    2.5

    40 PAA29:1

    0.2

    0.4

    0.5

    1

    TEMED

    0.002

    0.004

    0.005

    0.01

    10 APS

    0.02

    0.04

    0.05

    0.1

    三 电泳:

    凝胶凝固好后,根据以下配方准备电泳缓冲液。

    5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制-1 L:将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中,加入约900 ml水彻底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。

    在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样,电泳,一般是浓缩胶80V,分离胶120V恒压,等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后,结束电泳,染色或者进行下一步实验。



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