免费咨询电话: 400-699-0631      点击这里给我发消息
 
 
 
产品分类
 
·PCR
 
 
 





RTD6132 RealPAGE plus彩色凝胶快速制备及电泳试剂盒
 产品货号: RTD6132
 产品名称: RTD6132 RealPAGE plus彩色凝胶快速制备及电泳试剂盒
 产品价格/规格: 125块 350元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2021-11-23
详细信息   访问次数:

  • 产品介绍
  • 发表文章
  • 相关产品
  • 质检证书
  • RealPAGE plus彩色凝胶快速制备及电泳试剂盒

     RealPAGE plus Color Gel Fast Preparation & Electrophoresis Kit


    货品规格:

    货号

    说明

    制胶数量

    RTD6132-08

    制备8%PAGE

    125 0.75mm

    901 mm

    601.5 mm

    RTD6132-10

    制备10%PAGE

    RTD6132-12

    制备12%PAGE

    RTD6132-15

    制备15%PAGE

    ●  货品内容:

    组份

    货号

    名称

    规格

    保存

    1

    AC2905

    上层胶聚合溶液A2×)

    80 ml

    4

    2

    RTD6132-03

    彩色上层胶溶液B2×)

    80 ml

    4

    3

    AC2908

    下层胶聚合溶液A 8%2×)

    250 ml

    4

    AC2910

    下层胶聚合溶液A 10%2×)

    250 ml

    4

    AC2912

    下层胶聚合溶液A 12%2×)

    250 ml

    4

    AC2915

    下层胶聚合溶液A 15%2×)

    250 ml

    4

    4

    RTD6132-02

    下层胶溶液B2×)

    250 ml

    4

    5

    AP020P

    APS(干粉)

    5 ml

    RT;

    溶液-20℃贮存

    6

    TA0761

    TEMED

    0.5 ml

    4,避光

    7

    PL080

    5×MonoColor蛋白上样缓冲液(变性,还原)

    1 ml

    -20

    8

    PL111

    非变性非还原蛋白上样缓冲液

    1 ml

    -20

    说明书

    一份

    产品简介:

    该产品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理,采用合理设计的预混合配方和配制流程,可在50分钟内配制得到高质量的聚丙烯酰胺凝胶,用于变性和非变性蛋白凝胶电泳。本产品可以配制常用分离胶浓度8%、10%、12%和15%,可以满足绝大多数蛋白电泳需求。

    本试剂盒大约可以配制50-125块常规大小(8×10cm)PAGE凝胶,具体数量根据凝胶厚度决定:0.75mm厚度凝胶可以配制125块胶,1mm厚度凝胶可以配制至少90块胶,1.5mm厚度凝胶可以配制至少60块胶。

    ● 运输和贮存:

    本产品常温运输;组份按照标签温度贮存;有效期一年。

    特点:

    1. 方便:彩色上层胶,方便上样;上层胶和下层胶溶液1:1混合,无需计算;

    2. 安全:不用接触有毒粉末;

    3. 兼容性广:制胶溶液中不含SDS,可用于非变性电泳(Native-PAGE);

    使用说明:

      凝胶制备:

    1.1参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

    1.2 根据下表参考选择合适的凝胶浓度

    表一不同浓度的PAGE下层胶的最佳分离范围

    下层胶(分离胶)浓度

    最佳分离范围

    8%

    50-350 kD

    10%

    20-150 kD

    12%

    15-100 kD

    15%

    10-80 kD








    1.3 根据下表配制凝胶:

    表二 凝胶配制表

    下层胶配方

    上层胶配方

    胶厚度

    下层胶溶液B

    下层胶聚合溶液A

    10% APS

    TEMED

    胶厚度

    上层胶溶液B

    上层胶聚合溶液A

    10% APS

    TEMED

    0.75 mm

    2 ml

    2 ml

    40 μl

    4 μl

    0.75 mm

    0.5 ml

    0.5 ml

    10 μl

    1 μl

    1.0 mm

    2.7 ml

    2.7 ml

    60 μl

    6 μl

    1.0 mm

    0.75 ml

    0.75 ml

    15 μl

    1.5 μl

    1.5 mm

    4 ml

    4 ml

    80 μl

    8 μl

    1.5 mm

    1 ml

    1 ml

    20 μl

    2 μl

    1.3.1 取等体积下层胶溶液B 和下层胶聚合溶液A ,各 2.0/2.7/4.0 ml,混匀;

    1.3.2混合溶液中加入 40/60/80 μl的10% APS和4/6/8 μl的TEMED,轻轻混匀,将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可;

    注意:此溶液为过量,请勿全部注入。

    1.3.3 沿玻璃板缓慢加入适量灭菌水或无水乙醇覆盖于下层胶之上,待下层胶凝固后,倒去上层水或乙醇;

    注意:当水(乙醇)和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝固;25℃5-10分钟可以聚合。

    1.3.4 取等体积上层胶溶液B和上层胶聚合溶液A ,各 0.5/0.75/1.0 ml,混匀;

    1.3.5向混合溶液中加入 10/15/20 μl 的10% APS和1/1.5/2 μl的TEMED,轻轻混匀,插入梳齿;

    1.3.6 待上层胶凝固后 (约20-40 min),拔去梳齿即可用于电泳。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。

    上层胶25℃ 20-25分钟可以聚合;18℃ 35-40分钟可以聚合。

      电泳:

    2.1 SDS-PAGE变性电泳:

    2.1.1电泳缓冲液配制:

    将5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液干粉(自备,组份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris,0.5% SDS)全部倒入1L烧杯中,加入约900 ml水彻底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。

    2.1.2 样品处理:融化-混合-变性-上样

    5×MonoColor蛋白上样缓冲液常温数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀;将缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀,如8 μl样品加入2 μl 5×上样缓冲液;将蛋白样品置于95℃中加热5-10分钟;蛋白样品加入凝胶加样孔内电泳。

    2.1.3 电泳过程;

    在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,用1ml吸头彻底冲洗加样孔,随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。

    表三 SDS-PAGE电泳条件

    恒电压

    起始电流(一板胶)

    结束电流(一板胶)

    电泳时间

    适用条件

    150V

    35-40 mA

    15-20 mA

    55 + min

    最佳电压,最优的分辨率

    200V

    45-55 mA

    20-25 mA

    45+ min

    节省时间

    225V

    40-50 mA

    15-20 mA

    35+ min

    250V

    65-75 mA

    20-25 mA

    30+ min

    300V

    70-80 mA

    25-35mA

    25+ min

    最省时间

    2.2 非变性电泳(Native PAGE):

    2.2.1电泳缓冲液配制:

    将5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉(自备,组份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris)全部倒入1L烧杯中,加入约900 ml水彻底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。

    2.2.2 样品处理:融化-混合-上样

    5×非变性非还原蛋白上样缓冲液常温数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀;将缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀,如8 μl样品加入2 μl 5×上样缓冲液;蛋白样品加入凝胶加样孔内电泳。注:非变性电泳样品不能加热处理。

    2.2.3 电泳过程;

    在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,用1ml吸头彻底冲洗加样孔,随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。

    表四 Native PAGE电泳条件

     

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    适用条件

    推荐电压

    150V

    25-35/板胶

    5-10 mA/板胶

    60 + min

    最佳电压,最优的分辨率

    . 染色:

    1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量FastBlue蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。

    2. 摇床常温摇动10-15分钟至条带清晰可见。

    3. 加入适量蒸馏水脱色,期间更换1-2次蒸馏水,摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。

    4. 观察保存结果。

    . 实验示例:



TOP】【打印本页】【关闭窗口



中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 版权所有 京ICP备12052607 网站管理   快递查询   IF查询
电话:010-58437227 免费电话:400-699-0631 传真:010-57909566
点击这里给我发消息   内勤订货QQ:2446698252   技术支持QQ:460449375 电子邮箱:real-times@vip.163.com
注意:公司所有产品仅供科研使用
_×
在线咨询