全能核酸酶（Benzonase）

●  产品组成：

● 贮存、运输及效期：

-20℃贮存；湿冰运输；有效期一年。

● 产品简介：

全能核酸酶（Benzonase）是由粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）分泌的、由两个大小为 26 kDa 的亚基组成的一种广谱核酸酶，又称非限制性核酸内切酶，其活力比 DNase I 强 34 倍，能以相同的效率酶切单链和双链DNA和RNA，将其消化成3~5碱基长度（杂交限度以下）的 5'- 单磷酸寡核苷酸。其发挥活性需要 Mg²⁺，最佳活性pH 范围为 6~10，最适反应温度为 37℃ 。

本产品在野生型的 Benzonase 的基础上经过基因工程改进，在酵母中表达纯化所得，无细菌内毒素残留，在非常广泛的条件下（6 M urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF，0.4% Sodium deoxycholate）都能保持很高的稳定性和消化活力，非常适用于作为各类科学研究以及疫苗、蛋白、多糖类制药工业的首选酶制剂，去除样本或制品中的核酸残留，提升样本纯度和制品生物功效。

● 活性定义：

1 活性单位 (U) 是指在 37℃ ，pH8.0 反应条件下，2.625 ml 反应体系中，在 30 min 内使 A260 吸收峰值变化 1.0（相当于完全消化37 μg 鲱鱼精 DNA 成为寡核苷酸）所用的酶量。

● Benzonase失活或抑制：

1. Benzonase 核酸酶需要 1-2 mM Mg²⁺ 才能发挥活性，因此EDTA 浓度大于 1 mM 时会抑制 Benzonase 活性。不可逆失活仅可在极端条件下完成（100 mM NaOH，70℃，30 分钟）。

2. 高于0.1% SDS会抑制Benzonase 活性。

3. 当尿素浓度未达到 6 M 时，Benzonase 核酸酶活性会增加；尿素浓度达到 6 M 后，酶活性首先增加，然后随着时间的推移逐渐下降。尿素达到 7 M 时，Benzonase 核酸酶在 15 分钟后变性，并且失去活性。但在核酸酶失活之前，核酸会先明显降解。提高 Benzonase 核酸酶初始浓度可部分补偿 7 M 尿素浓度影响。

● 使用方法：

1. 全能核酸酶的有效工作温度是 0~42℃ ，最佳工作温度是 37℃ 。低温使用酶活性有所降低，可通过多添加 2~5 倍Benzonase或延长消化时间 (2~3 h) 来进行活力补偿；

2. 酶活性~250 U/μl，产品以液体酶形式提供，可以按照体系1/1000-1/100体积直接加入反应体系中使用（酶终浓度为250 U/ml-2500 U/ml）。

注：由于SDS会影响该酶活性，使用RIPA提取蛋白时，可以大体按照RIPA加入体积的1/200加入酶液（酶终浓度为1250 U/ml），如使用0.4 ml RIPA，加2 μl Benzonase，37℃处理15分钟， 此时提取液的粘度会大大降低，基本没有粘稠现象；16000 g 离心10 min，取上清即为总蛋白。