RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
● 产品货号及规格：
|
货号
|
包装
|
贮存
|
|
RTR2103-01
|
50次×20μl
|
-20℃
|
● 产品组成：
|
组成
|
包装
|
|
5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix
|
200 μl
|
|
gDNA Remover
|
50 μl
|
|
10×gDNA Remover Buffer
|
100 μl
|
|
RNase-free H2O
|
1 ml
|
● 产品简介：
本试剂盒含有反转录需要的全部试剂（RTScript MMLv Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，dNTP、反应
Buffer，Oligo (dT)18，Random primer）,浓度为5×。进行RNA反转录反应时，只需加入模板和RNase Free H2O 即可高效合成第一链cDNA，大大简化了操作过程、提高了效率、减少了操作过程中的人为误差。本制品含有去基因组成分gDNA Remover，以RNA为模板进行cDNA第一链合成时，可以同步去除基因组DNA污染，与传统DNaseI消化对比，gDNA Remover消化后无需加入EDTA进行失活；反应结束后，65℃加热2分钟，就可以不可逆失活。具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。该试剂盒采用的反转录酶去除了 RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。 同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受50℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录可显著打开 RNA二级结构，从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA的长度（可以获得12 kb cDNA）和产量，从而提高后续检测的灵敏度。合成的第一链 cDNA可广泛用于 2nd
Strand 的合成、 杂交、 PCR扩增、Real-Time PCR 反应等。
● 贮存和运输：
开封后-20℃贮存两年；湿冰运输。
● 使用方法：
一. 去除基因组DNA污染：
1.1冰上配制如下体系：
|
组份
|
加入体积
|
|
Total
RNA/mRNA
|
100ng-2μg(＜8
μl)
|
|
gDNA
Remover
|
1μl
|
|
10×gDNA
Remover Buffer
|
1
μl
|
|
RNase-free
H2O
|
up
to 10 μl
|
1.2轻柔混匀，快甩离心，37℃处理 2 min，去除基因组污染，冰上放置。
注：若RNA中基因组DNA污染严重，可以延长37℃处理5
min。
1.3
65℃处理2 min，失活gDNA Remover，冰上放置。
二. 第一链cDNA合成（反转录反应）：
2.1冰上配制如下体系：
|
组份
|
加入体积
|
|
步骤1中的反应液
|
10
μl
|
|
5×RTScript
1st Strand cDNA Synthesis MasterMix
|
4
μl
|
|
RNase-free
H2O
|
6
μl
|
2.2
反转录：轻柔混匀，快甩离心； 50℃孵育15 min，
2.3
终止反应：85℃孵育 5 min，终止反应。
反应产物可直接用于 PCR，如果不立即使用，-20℃
保存，长时间保存建议-80℃ 放置。
● 注意事项：
5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix中已经包含Oligo (dT)18和Random primer，不仅适用于包含poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含poly(A)结构的原核生物RNA，真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。