Reverse Transcriptase
M-MLV（RNase H-）
M-MLV反转录酶(RNase缺失)
● 产品货号及规格：
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货号
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名称
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浓度
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包装
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贮存
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RTR2102-01
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Reverse Transcriptase
M-MLV
（RNase H-）
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200U/μl
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2000U
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-20℃
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RTR2102-02
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5×RT buffer
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5×
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0.2 ml
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-20℃
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● 产品简介：
M-MLV反转录酶(RNase H-)，是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比，缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性，不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，可以合成长片段从DNA。
本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200 U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。
特点：M-MLV反转录酶(RNase
H-)可以合成长达9-13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase
H-)在37℃反应时的一些不足。
用途：M-MLV反转录酶(RNase
H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
来源：该反转录酶(RNase
H-)由大肠杆菌表达
活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1
nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at37℃.
Enzyme activity is assayed in50 mMTris-HCl (pH 8.3),6 mMMgCl2,10 mMDTT,40 mMKCl,0.5 mMdTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP0.4 mMpolyA?oligo(dT)12-18.
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
酶储存溶液：50 mMTris, pH 8.3,100mMNaCl,1 mMEDTA,5 mMDTT, 0.1%
Triton X-100 and 50% glycerol。
5×RT buffer：250 mMTris, pH 8.3 at25℃,250 mMKCl,20 mMMgCl2，50mM DTT。
失活或抑制：70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase
H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(Rnase H-)有抑制作用。
● 使用说明：
cDNA第一链合成：
1. 0.2ml PCR管中配制模板/引物变性混合液：
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加样顺序
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试剂
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使用量
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1
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模板RNA
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1 ng-1 μg*
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2（后面3种任选一种）
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Oligo(dT)18 primer(100 μM)
or Random primer(100 μM)
or Specific primer(10 μM)
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0.5 μl
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3
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RNase-free 水
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Up to 6 μl
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注：* Total RNA 的使用量一般为1 ng-1 μg；mRNA的使用量一般为 10 pg-1 μg。
2.70℃保温 10 分钟后迅速在冰上急冷 2 分钟以上。
注：此步骤是打开RNA的一些比较稳定的二级结构。
3. 离心数秒钟使模板 RNA/引物的变性混合液聚集于离心管底部。
4. 在上述离心管中配制下列反转录反应液。
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加样顺序
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试剂名称
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使用量
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1
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模板/引物变性混合液
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6 μl
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2
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5×RT buffer
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2 μl
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3
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10mM dNTP
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0.5 μl
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4（可选）
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RNase Inhibitor(40U/μl)
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0.25μl
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5
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M-MLV(RNaseH-)
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0.25-1μl*
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6
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RNase-free 水
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up to 10μl
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* 当起始模板 RNA量＞500
ng 时， M-MLV（RNase
H-）的使用量应＞0.25 μl。
5. 若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物，42℃温育30
min；若使用随机引物，先30℃温育5 min，之后42℃温育30
min；
6. 70℃保温10分钟后冰上冷却，得到的 cDNA溶液可直接用于PCR扩增，PCR扩增时 cDNA溶液的推荐使用量50μl体系加2 μl。
注：cDNA溶液置于-20℃可保存半年；置于-80℃可长期储存。
引用RTR2102 M-MLV(RNase
H-) 反转录酶发表文章
使用该产品发表部分文章列表：
1. [2018 IF=3.8] High-Throughput
Sequencing Analysis of Small RNAs Derived from Coleus Blumei Viroids
Author: Dong-Mei Jiang , Meng Wang , Shi-Fang Li, Zhi-Xiang
Zhang
Journal: Viruses 2019, 11, 619
Institution：Institute of Plant Protection,Chinese
Academy of Agricultural Sciences
Paper link： https://www.mdpi.com/1999-4915/11/7/619