BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA Protein Assay Kit Ver.751259-2.0
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货号
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名称
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规格
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RTP7102
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BCA蛋白浓度测定试剂盒
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50次（试管法）
500次（微板法）
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● 试剂盒组成：
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货号
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产品名称
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包装
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RTP7102-01
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BCA试剂A
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100 ml
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RTP7102-02
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BCA试剂B
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3 ml
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BSA-01
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牛血清白蛋白(BSA)标准溶液（5
mg/ml）
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2×1 ml
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RT0280-02
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PBS溶液
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10 ml
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说明书
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1份
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● 贮存、运输及效期：
试剂A和试剂B常温温贮存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存；PBS溶液4℃贮存。试剂盒常温运输；有效期1年。
● 产品简介：
BCA蛋白浓度测定试剂盒的原理是蛋白质分子中肽键结构在碱性环境下能与Cu2+生产络合物，并将Cu2+还原成Cu+，而BCA试剂可以特异性地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，并在562
nm处有最大的光吸收值，该复合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可以根据吸收值的大小来测定蛋白的含量。本试剂盒可以检测500个样品（使用微孔板）或50个样品（使用试管）。
● 产品特点：
1.
灵敏度高，检测浓度下限达到25 μg/ml（在20-1000
μg/ml浓度范围内有较好的线性关系），最小检测蛋白量达到0.2
μg，待测样品体积为1-20
μl。
2.
BCA法测定蛋白浓度的最大优点是蛋白浓度测定可以耐受高浓度的去垢剂，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton
X-100，5%的Tween
20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10 mM，无EGTA，二硫苏糖醇（DTT）低于1 mM，β-巯基乙醇低于0.01%。具体参见五.干扰物质附表。
● 操作方法
一．BCA工作液配制：
1.1 计算工作液总量：
工作液总量 =（BSA标准品样本个数×复孔数+样本个数×复孔数）×每个样本工作液体积
以微板法举例：
BSA 标准品样本个数为8个，复孔数3个；待测样本个数2个，复孔数2个。
显色工作液总量 =
(8个BSA
标准品样本×3＋2个待测样本×2)×200
μl(每个工作液体积)=5.6
ml
注：由于加样可能存在误差，建议配制
BCA 工作液时，多配制
1~2 个孔的量。
1.2
按照计算出的所需工作液用量，将试剂A和试剂B按照体积比50:1比例混合，配成BCA工作液。如取6
ml 试剂A与0.12
ml试剂B混合，配成6.12
ml BCA工作液。两者混合时会有沉淀形成，彻底混匀后沉淀消失，溶液应为澄清蓝绿色溶液。
注:新配制的BCA工作液常温密封条件下可稳定保存
24 h。
二．微孔板测定程序：（工作范围20-1000
μg/ml）
2.1
蛋白标准品配制：常温完全溶解蛋白标准品，取60 μl 5 mg/ml BSA蛋白标准溶液加240
μl PBS溶液，配制为300 μl终浓度为1
mg/ml BSA标准溶液。
2.2
按照下表配制BSA标准测定溶液：
|
编号
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
|
BSA终浓度 μg/ml
|
0
|
25
|
50
|
100
|
200
|
400
|
800
|
1000
|
|
1mg/ml BSA标准溶液 μl
|
0
|
2.5
|
5
|
10
|
20
|
40
|
80
|
100
|
|
PBS 溶液 μl
|
100
|
97.5
|
95
|
90
|
80
|
60
|
20
|
0
|
|
总体积 μl
|
100 μl
|
2.3
标准孔：取20 μl不同浓度标准品，加到微孔板中；
样品孔：取适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足到20
μl。
2.4
向微孔板中加入200
μl BCA工作液，混匀，37℃放置30分钟；
注：也可以常温放置2小时。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应会因温度升高而加快，如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
2.5
测定562
nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA
的样品的光吸收值作为空白对照。
2.6 以BSA含量为纵坐标， A562为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
三．试管测定程序：（工作范围20-1000
μg/ml）
3.1蛋白标准品配制：常温完全溶解蛋白标准品，取60
μl 5 mg/ml BSA蛋白标准溶液加240 μl PBS溶液，配制为300
μl终浓度为1 mg/ml BSA标准溶液。
3.2在5
ml离心管中，按照下表配制BSA标准测定溶液：
|
编号
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
|
BSA终浓度 μg/ml
|
0
|
25
|
50
|
100
|
200
|
400
|
800
|
1000
|
|
1mg/ml BSA标准溶液 μl
|
0
|
2.5
|
5
|
10
|
20
|
40
|
80
|
100
|
|
PBS 溶液 μl
|
100
|
97.5
|
95
|
90
|
80
|
60
|
20
|
0
|
|
总体积 μl
|
100 μl
|
3.3
将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到100
μl；
3.4
向标准管和样品管中加入2 ml
BCA工作液，混匀，37℃放置30分钟；
注：也可以常温放置2小时。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应会因温度升高而加快，如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
3.5 取1
ml溶液加入到1
ml玻璃比色皿中，测定562
nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA
的样品的光吸收值作为空白对照。
3.6 以BSA含量为纵坐标，A562为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
四．实验示例：
|
|
BSA标准品A562
|
BSA浓度
|
样品A562
|
测定浓度
|
稀释倍数
|
原始浓度
|
|
|
1
|
2
|
3
|
平均值
|
减去空白
|
ng/μl
|
减去空白
|
ng/μl
|
|
ng/μl
|
|
0
|
0.086
|
0.079
|
0.083
|
0.083
|
|
|
0.59
|
1068.7
|
×5
|
5344
|
|
1
|
0.094
|
0.089
|
0.093
|
0.092
|
0.009
|
25
|
0.309
|
555.7
|
×10
|
5557
|
|
2
|
0.109
|
0.106
|
0.115
|
0.11
|
0.027
|
50
|
|
|
|
|
|
3
|
0.145
|
0.147
|
0.151
|
0.148
|
0.065
|
100
|
|
|
|
|
|
4
|
0.205
|
0.202
|
0.205
|
0.204
|
0.121
|
200
|
|
|
|
|
|
5
|
0.307
|
0.318
|
0.32
|
0.315
|
0.232
|
400
|
|
|
|
|
|
6
|
0.52
|
0.513
|
0.53
|
0.521
|
0.438
|
800
|
|
|
|
|
|
7
|
0.623
|
0.619
|
0.659
|
0.634
|
0.551
|
1000
|
|
|
|
|
微孔板法：工作液总量 = (BSA标准品样本个数×复孔数+样本数×复孔数)×样本工作液体积=（8×3+2×1）×0.2 ml=5.2 ml；配制5.5
ml显色工作液：5.5
ml试剂A加入0.11
ml 试剂B，混匀；按照操作步骤配制各种浓度BSA标曲溶液100
μl，各取20 μl加到微孔板中；取待测样品4
μl和2
μl，分别加16
μl 和18
μl 1×PBS（稀释5倍和10倍），加到微孔板中；随后加入显色工作液200 μl，37℃ 20 min后读数，吸光值为横坐标，BSA浓度为纵坐标，做出标准曲线，y=1825.8x-8.5089，R2=0.999，样品蛋白浓度=5×（1825.8×0.59-8.5089）=5344
ng/μl=5.344 μg/μl或者样品蛋白浓度=10×（1825.8×0.309-8.5089）=5557
ng/μl=5.557 μg/μl。
五．干扰物质附表：
|
化合物
|
耐受浓度
|
化合物
|
耐受浓度
|
化合物
|
耐受浓度
|
|
缓冲液
|
去垢剂和变性剂
|
还原剂
|
|
甘氨酸
|
1 M
|
CHAPS
|
5%
|
DTT
|
1 mM
|
|
Bicine
|
20 mM
|
盐酸胍
|
4 M
|
β-巯基乙醇
|
0.01%
|
|
Bis-Tris
|
33 mM pH6.5
|
Triton X-100
|
5%
|
TCEP
|
不兼容
|
|
HEPES
|
0.1 M pH7.5
|
Triton X-114
|
1%
|
螯合剂
|
|
MES
|
50 mM
|
NP-10
|
5%
|
EDTA
|
10 mM
|
|
MOPS
|
50 mM
|
Tween 20
|
5%
|
EGTA
|
不兼容
|
|
柠檬酸钠
|
200 mM pH4.8
|
SDS
|
5%
|
糖类
|
|
PIPES
|
50 mM
|
脱氧胆酸钠
|
5%
|
葡萄糖
|
10 mM
|
|
TES
|
50 mM
|
尿素
|
3 M
|
蔗糖
|
40%
|
|
Tricine
|
25 mM pH8.0
|
盐类
|
有机化合物
|
|
Tris-HCl
|
250 mM pH8.0
|
氯化钠
|
1 M
|
甘油
|
10%
|
|
醋酸钠
|
0.2 M pH5.5
|
硫酸铵
|
1.5 M
|
乙醇
|
10%
|
|
咪唑
|
50 mM pH7.0
|
酸碱
|
甲醇
|
10%
|
|
三乙醇胺
|
25 mM pH7.8
|
盐酸
|
100 mM
|
DMSO
|
10%
|
|
磷酸钠
|
100 mM
|
氢氧化钠
|
100 mM
|
丙酮
|
10%
|
使用RTP7102 BCA蛋白定量试剂盒发表部分文章列表（12篇）
1. [2022 IF=1.09] MACC1
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natural killer cells.
Author: Chong Zhao,
Yuehua Liu, Zhuoping Liang, Huajun Feng & Sheng’en Xu
Journal: Biotechnology
& Biotechnological Equipment. Volume 33, 2019 - Issue 1
Institution： Affiliated Hospital of Southwest
Medical University
Paper link： https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/13102818.2019.1596041
2. [2022 IF=8.469]
Decreased ZNF750 promotes angiogenesis in a paracrine manner via activating DANCR/miR-4707-3p/FOXC2
axis in esophageal cell carcinomasquamous.
Author: Yanghui Bi,
Shixing Guo，Yongping Cui
Journal: Cell
Death & Disease (2020) 11:296
Institution：Shanxi Medical University
Paper link：https://doi.org/10.1038/s41419-020-2492-2
3. [2022 IF=1.6] Molecular
mechanism of microRNA-26a regulation of phosphatase and tensin homolog gene in
condyloma acuminatum and penile squamous cell carcinoma.
Author: Yayu Hu,Xiaoli
Ren
Journal: Journal of International Medical Research (2021) 49(7) 1–13
Institution：Taizhou Municipal Hospital
Paper link：https://journals.sagepub.com/doi/10.1177/03000605211014379
4. [2022 IF=13.164]
Verticillium dahliae Secretory Effector PevD1 Induces Leaf Senescence by
Promoting ORE1-Mediated Ethylene Biosynthesis.
Author: Yi Zhang, Yuhan
Gao, Hou-Ling Wang, Chengcheng Kan, Ze Li, Xiufen Yang,Weilun Yin, Xinli Xia,
Hong Gil Nam, Zhonghai Li, Hongwei Guo.
Journal: Molecular
Plant. 2021,20 July.
Institution：Beijing Forestry University, Beijing
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.molp.2021.07.014
5. [2022 IF= ] Enhancing
the Methanol Tolerance of Candida antarctica Lipase B by Saturation Mutagenesis
for Biodiesel Preparation.
Author: Zhongbiao Tan,Xiangqian Li
Journal: Research
Square
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Paper link：https://www.researchsquare.com/article/rs-813893/v1
6. [2022 IF=4 ] The
effects of microRNA-126 reduced inflammation and apoptosis of diabetic
nephropathy through PI3K/AKT signalling pathway by VEGF.
Author: Zhe Lou, Qiaobei Li, Chunyan Wang and
Yinyan Li
Journal: Archives
of Physiology and Biochemistry Published
online: 25 May 2020
Institution：the First Affiliated Hospital of China
Medical University
Paper link：https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/13813455.2020.1767146
7. [2022 IF=3.7] Circ_0138960
knockdown alleviates lipopolysaccharide-induced inflammatory response and
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Author: Changfu Liang, Wenzhi Wu, Xiaoning He,
Fengming Xue,Daxing Feng
Journal: Journal
of Dental Sciences Published
online: 2022
Institution：Department of Stomatology, The Second
Affiliated Hospital of Hainan Medical University
Paper link： https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1991790222001441
8. [2022 IF=2.1]Transferrin receptor modulated by
microRNA-497-5p suppresses cervical cancer cell malignant phenotypes.
Author: Xiangming Fang, Pei Hu, Ying Gao, Chuqiao
Chen, Jianqing Xu
Journal: Advances
in Clinical and Experimental Medicine Published online on July 24, 2023
Institution：Zhejiang Shuren University
Paper link： https://advances.umw.edu.pl/en/ahead-of-print/168342/
9. [2022 IF=2.7] Detection of N?glycoprotein associated with IgA
nephropathy in urine as a
potential diagnostic biomarker using glycosylated proteomic analysis.
Author: Junjie Liu, Liuguo Wu,
Hongjing Gu, Miaomiao Lu, Jiong Zhang
And Hongli Zhou
Journal: Experimental
And Therapeutic Medicine 26: 478,
2023
Institution：Department of Nephrology, The First
Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University
Paper link： https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37753295/
10. [2022 IF=2] Up-regulation of Trim28 in
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endothelial cells through the p38 signaling pathway.
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Zhang, Jing Zhao and Li Zhao
Journal: Histology
and Histopathology (2024) 39: 603-610
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of Qingdao University
Paper link： https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37522419
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Journal: Journal
of Experimental Botany Published: 15 March 2024
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Agricultural University
Paper link： https://doi.org/10.1093/jxb/erae121
12. [2023 IF=2.8] Anti?tumor activity
of butorphanol in colorectal cancer via targeting SIGMAR1.
Author: Xueqi Hou,
Longfei Qu,Yong Xu,Jie Liu, Jianlian Guo
Journal: Discover
Oncology (2024) 15:711
Institution：School of Medicine, Xiamen University
Paper link： https://doi.org/10.1007/s12672-024-01581-1