单链RNA Marker（10-50 nt）                             Ver.760355-1.0

● 产品编号及规格：

● 产品简介：

单链RNA  Marker由不同长度的9条单链RNA分子混合而成，9条带的大小为10，15，20，25，30，35，40，45，50 nt。每条带浓度约为300 ng/μl（配成即用型RNA Marker后，每条带的浓度约为150 ng/μl）。使用前与等体积2×RNA上样缓冲液混合即可上样电泳。该Marker适用于跑尿素变性胶，电泳后可以使用核酸染料如RealSafe Red（货号：GR002）或RealSafe All（货号：GR004）均可以染色得到清晰的条带分离效果。由于片段很小，不适用于琼脂糖凝胶电泳。

产品内附带2×RNA上样缓冲液 (尿素变性胶，RNase-free)。以每次上样5 μl计算，混合好的单链RNA Marker可以使用大约20次。

●  保存条件和运输：

-20℃贮存；有效期12个月；湿冰运输。

● 注意事项：

 1. ssRNA Marker（10-50 nt）与普通RNA一样极易被 RNase 降解，因此实验时请戴好手套、口罩，实验的仪器及溶液应经DEPC处理，凝胶及电泳缓冲液应现用现配。操作过程中须严格注意避免RNase污染，并尽量减少产品暴露于空气中的时间，取用后立即盖上盖子。

2. 单链RNA Marker(10-50 nt)产品适用于变性PAGE垂直电泳，不适用于水平琼脂糖凝胶电泳。

3. 建议单链RNA Marker(10-50 nt)现用现配，因为混合有上样缓冲液的单链RNA稳定性不好。

4. 本产品用作单链RNA的分子量标准时，不建议用于精确确定RNA长度，因为RNA中不同核苷酸的组分也会对电泳迁移率产生一定的影响。

● 使用方法：

注：以下使用方法均以8×10cm凝胶 厚1.0mm示例，其他规格凝胶请适当调整。

一. 凝胶制备：

1.1 可以选择RNA尿素PAGE电泳试剂盒（Cat：RTE4103））或按照以下程序制胶。

1.2．分离胶配制：将除催化剂以外不同体积的成分混合，漩涡搅拌至尿素彻底溶解，最后再加入催化剂APS和 TEMED。

TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)

1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿下沿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

1.4静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

1.5去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml，适用于1.0mm厚度胶)

1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

1.7常温静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

二. 样品制备：

取适量体积单链RNA Marker样品与等体积的2×RNA上样缓冲液 (尿素变性胶，RNase-free)混合，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。待测样品也需要进行同样处理。

三.电泳：

3.1电泳槽内外加入1×TBE缓冲液，用缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。

3.2上样：根据梳齿确定Marker上样量， 一般是10齿1mm厚梳子Marker上样5 μl，15齿1mm厚梳子上样3 μl。

3.3 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。

注：恒压下电泳，电流是逐渐降低的，不用调节，记录电流变化数值。

3.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。

注：在15%TBE-尿素胶中，溴酚蓝指示前沿位置大约相当于15 nt RNA片段的位置。

四．染色：

单链RNA推荐用RealSafe Red（货号：GR002）或RealSafe All（货号：GR004）染色，两种染料均可以得到清晰的条带分离效果。注：其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。

● 实验示例：