单链DNA Marker（15-120 nt）
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货号
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名称
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规格
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RTM506
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单链DNA Marker（15-120 nt）
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10次
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● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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RTM506-01
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单链DNA Marker（15-120 nt）
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50 μl
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素上样缓冲液
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1 ml
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-20℃
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● 产品简介：
单链DNA Marker由6条不同长度的单链DNA分子混合而成，6条带的大小为15，40，60，80，100，120 nt，80 nt 浓度为0.4 μg/μl，其余条带浓度为0.2
μg/μl。该Marker适用于跑尿素变性胶，电泳后使用单链DNA
PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102），核酸快速高灵敏度染色试剂盒（Cat：RTS5101）或RealSafe类核酸染料染色均可以得到清晰的条带分离效果。
样品保存在1×TBE尿素上样缓冲液中，上样方便。以每次上样5 μl计算，该单链DNA
Marker可以使用大约10次。
● 保存条件和运输：
-20℃贮存，有效期24个月；湿冰运输。
● 使用方法：
注：以下使用方法均以8×10cm凝胶 厚1.0mm示例，其他规格凝胶请适当调整。
一. 凝胶制备：
1.1 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒（Cat：RTE4102））或按照以下程序制胶：
表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)
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单链DNA长度
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最佳凝胶浓度
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尿素（克）
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40%PAA
（29:1）
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5×TBE
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补水到总体积
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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最后加入10%APS和TEMD后，立即混匀。
1.2在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.3静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
1.4去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml，适用于1.0mm厚度胶)
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各组份体积（ml）
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凝胶浓度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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5×TBE
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灭菌水
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克
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0.2 ml
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0.4 ml
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补水至体积2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
1.6静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二. 样品制备：
2.1
取适量体积单链DNA
Marker样品，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样；待测样品序与2×TBE尿素上样缓冲液等体积混合后70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。
三.电泳：
3.1. 预电泳（可选）：电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。电泳结束后，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。
3.2.上样：根据梳齿确定Marker上样量， 一般是10齿1mm厚梳子上样5
μl，15齿1mm厚梳子上样3
μl。
3.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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适用条件
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推荐电压
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200V
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15-20 mA/板胶
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10-15 mA/板胶
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60+ min
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最佳电压，最优的分辨率
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3.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
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变性胶浓度
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溴酚蓝
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二甲苯菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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8 nt
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42 nt
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四．染色：
用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102）或核酸快速银染试剂盒（Cat：RTS5101）染色均可以得到清晰的条带分离效果。
注：如果使用核酸染料染色，RealSafe
Red（货号：GR002）或RealSafe
All（货号：GR004）核酸染料结合单链核酸效果最佳，强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
● 电泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）染色：
2. 使用核酸快速高灵敏度染色试剂盒（货号：RTS5101）染色：
