10bp 双链RNA ladder
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货号
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名称
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规格
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RTM504
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10bp 双链RNA ladder
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25次
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● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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RTM504-01
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10bp dsRNA ladder
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100 μl
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RTM504-02
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5×RNA上样缓冲液
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1 ml
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● 产品简介：
10bp
dsRNA ladder由长度20
bp至1,000
bp的10条dsRNA（双链RNA）片段组成，片段大小为20，30，40，50，100，200，300，400，500，1000 bp，其中100 bp的双链 RNA片段为增强带，显示亮带，可作为参照。
本产品为双链RNA
Marker，适用于非变性的PAGE电泳，不适用于变性PAGE电泳（尿素），也不建议用于琼脂糖电泳。可以用于制备siRNA（小干扰RNA，Small interfering RNA）时标记双链RNA片段大小。
按照每次上样5
μl计算，该产品配制好即用型产品可以使用约25次。
注意：
1.由于RNA极易污染后降解，实验操作时采取必要措施防止RNase污染，如佩戴一次性手套，使用专用RNase-free吸头及离心管等；不要在同一区域进行涉及RNase的实验，如质粒提取等。
2.由于dsRNA序列不同，显示的片段长度会略有不同；使用的siRNA片段中含有DNA片段时，片段大小会略有差异。
● 储存条件：
-20℃ 贮存，有效期一年。
● 使用方法：
一、即用型10bp dsRNA ladder配制方法：
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即用型10bp dsRNA ladder配制量
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5 μl
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10 μl
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15 μl
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20 μl
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10bp
dsRNA ladder
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4 μl
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8 μl
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12 μl
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16 μl
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5×RNA上样缓冲液
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1 μl
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2 μl
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3 μl
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4 μl
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注：即用型dsRNA Marker建议现用现配，不建议配制后保存，保存后会导致电泳后条带模糊。
二、 TBE-PAGE凝胶制备：
2.1 制备凝胶步骤：
2.1.1参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2.1.2按照表一将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；最后加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
注：10 bp dsRNA ladder 适用于配制15%TBE-PAGE胶。
2.1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。
2.1.4静置10-20分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
表一 TBE-PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于1mm厚度小板胶)
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各组份体积（ml）
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最佳dsRNA分离范围
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凝胶浓度
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灭菌水
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30%PAA(29:1)
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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70-450 bp
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6%
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3
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1.0
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1
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0.05
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0.005
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60-460 bp
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8%
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2.66
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1.34
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1
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0.05
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0.005
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50-300 bp
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10%
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2.33
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1.67
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1
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0.05
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0.005
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40-200 bp
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12%
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2
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2.0
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1
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0.05
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0.005
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25-150 bp
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15%
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1.5
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2.5
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1
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0.05
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0.005
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5-100 bp
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20%
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0.66
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3.34
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1
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0.05
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0.005
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2.1.5去除覆盖在分离胶上的乙醇；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二 TBE-PAGE 4%浓缩配方表 (总体积1.5 ml，适用于1mm厚度小板胶)
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各组份体积（ml） 总体积1.5 ml
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凝胶浓度
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灭菌水
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30%PAA(29:1)
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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4%
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1
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0.2
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0.3
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0.02
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0.002
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2.1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
2.1.7静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
2.2电泳：
2.2.1 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入1×TBE电泳液，1 ml吸头冲洗加样孔1-2次。
2.2.2 取待测样品，加入相应体积5×RNA上样缓冲液，如8 μl样品加2 μl 上样缓冲液，短暂离心后取5-10 μl上样。 即用型10 bp dsRNA ladder 1 mm厚10齿梳子上样5 μl，其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。
2.2.3 连接电源线，打开电源开关。150 V稳压电泳，至溴酚蓝指示前沿距离玻璃下沿2 cm时结束电泳（参见下图）。
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TBE-PAGE电泳
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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150 V
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15-25
mA/板胶
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8-15 mA/板胶
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50+min
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15%T3.3C TBE-PAGE
溴酚蓝前沿大小约15bp dsRNA，二甲苯菁大小约60bp dsRNA。
3、染色：
3.3.1 漂洗：玻璃板上拆下凝胶后，适量蒸馏水漂洗3-5分钟。
3.3.2 染色液配制：
TBE-PAGE胶可以使用EB或RealSafe核酸染料后染染色，以下程序用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）进行染色。即用型染色液配制：
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即用型RealSafe核酸染色液
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100 ml
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1×TBE
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100 ml
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RealSafe Red核酸染料
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20 μl
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3.3.3染色和观察：
凝胶浸泡于即用型染色液中，常温避光摇床40-60 rpm染色30 分钟。紫外光下观察。
三、实验示例：
15％TBE-PAGE电泳
左1：10bp DNA ladder（货号：RTM443） 5μl
左2：20bp DNA ladder（货号：RTM441） 5μl
左3：即用型10 bp dsRNA ladder 5μl
（4 μl 10 bp dsRNA ladder加1 μl 5×RNA上样缓冲液）
凝胶长度：8 cm
电泳条件：稳压150 V 起始电流20 mA，终止电流10 mA
电泳缓冲液：1×TBE
电泳时间：50分钟
染色：RealSafe Red核酸染料后染30分钟