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退火缓冲液(5×)

退火缓冲液(5×)

产品编号:RTE3105

产品规格:5×1ml

数量
价格 ¥200

DNA退火缓冲液(5×)

 

●     产品组成:

货号

名称

规格

贮存

RTE3105

DNA退火缓冲液(5×)

5×1ml

-20

保存:-20

产品简介:

DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液,是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液,可用于常规的DNA oligo的退火,尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。该缓冲液能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接,转化后可以得到大量的阳性克隆。

本试剂操作简单,只需把待退火的DNA oligo和退火缓冲液按照一定比例混合后,置于PCR仪上进行程序降温,约90min即可完成。

操作步骤(仅供参考):

1、 把待退火的DNA oligo用经灭菌水配制成50μM,同时彻底溶解退火缓冲液(5×)备用。

2、 按如下反应体系操作:

顺序

组份

体积

1

灭菌水

40μl

2

退火缓冲液(5×)

20μl

3

DNA oligo A(50μM)

20μl

4

DNA oligo B(50μM)

20μl

 

Total

100μl

按照上述顺序,依次加入并混匀,如果所用PCR仪没有加热盖,可加入Mineral Oil防止液体挥发。

3、 按如下PCR仪的退火条件:

步骤

温度

时间

作用

1

95℃

2min

Oligo充分变性

2

90s下降1℃,降至25℃

90min

程序退火

3

-20℃

长期保存

暂时存放

注:如果使用的PCR仪无梯度降温功能,也可以95℃处理后自然冷却至常温。


 
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