糖蛋白染色试剂盒          Ver.760976-2.0

● 产品简介：                                                    

本试剂盒采用PAS反应检测糖蛋白。氧化试剂可氧化糖链中具有相邻羟基的糖基结构，使其生成醛基；生成的醛基与染色试剂反应，从而使糖蛋白条带呈现特征性的品红色。随后使用还原试剂处理，可消除未参与特异性显色反应的残余染色剂及其产生的非特异性背景，再经醋酸溶液充分漂洗，使凝胶或膜背景进一步降低，从而获得清晰的糖蛋白条带。整个染色2.5小时完成。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。

本试剂盒对糖蛋白的检测灵敏度通常可达到微克级，实际检测灵敏度与蛋白质的糖基化程度及糖链结构有关。适用于 SDS-PAGE、2D 电泳凝胶以及 NC 膜上的糖蛋白检测。

按照每次使用25 mL糖蛋白染色试剂计算，本产品可以染色 8-10块mini-PAGE（8×10cm）胶或或18-20张NC膜（8×8 cm）。

● 产品组成：

● 贮存、运输及效期：

按照标签温度贮存，常温运输。有效期一年。

●实验前准备：

1. 配制 3%醋酸溶液：将 15 mL 自备的冰醋酸与 485 mL 超纯水混匀，常温保存备用。

2. 配制 50%甲醇溶液：将 250 mL 甲醇与 250 mL 超纯水混匀，常温保存备用。

3. 配制氧化试剂溶液： 将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250 mL空塑料瓶中， 然后加入250 mL的超纯水，充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，常温保存备用。

4. 配制还原试剂溶液： 将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的 250 mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，常温保存备用。

5. 配制1×SDS-PAGE上样缓冲液：取0.4 mL 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液，加入1.6 mL超纯水，-20℃贮存备用。

6. 配制阳性对照（辣根过氧化物酶）溶液：取阳性对照小管快速离心30秒，将粉末收集到管底；向管中加入 1 mL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液（准备5），所得辣根过氧化物酶溶液的浓度即

为 1 mg/mL，然后适量分装成8-10管， 留下一管当天使用， 其余的放-20℃长期保存。 对于 8×10 cm的凝胶来说，每条泳道加 10 μL 的阳性对照溶液即可，上样前95℃处理5分钟。

7. 配制阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）溶液：取阴性对照小管快速离心30秒，将粉末收集到管底；向装有 1 mg 大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入1 mL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液（准备5），所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度即为 1 mg/mL，然后适量分装成8-10管， 留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于 8×10 cm的凝胶来说，每条泳道加 10 μL 的阴性对照溶液即可，上样前95℃处理5分钟。

8. 样品稀释：用 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液将样品浓度稀释为1 mg/mL，其中上样缓冲液终浓度为 1×。对于 8×10 cm的凝胶来说，每条泳道加 5-10 μL 的样品即可，上样前95℃处理5分钟。

● 凝胶染色的操作步骤（请在通风橱中进行以下操作）：

注意事项：

以下步骤仅针对0.75 mm厚度大小8×10cm的凝胶，1-1.5 mm厚度凝胶或更大体积凝胶适当增加液体体积并延长操作时间10-20 min。

一. 固定：

取出电泳后SDS-PAGE 凝胶，在50 mL 50%甲醇溶液中，摇床慢摇30分钟，弃甲醇溶液。

二. 漂洗：

50 mL超纯水洗涤凝胶两次，每次摇床慢摇10分钟，弃超纯水。

三. 氧化：

凝胶中加入 25 mL 氧化试剂，摇床慢摇15分钟，弃溶液。

四. 漂洗：

50 mL超纯水洗涤凝胶3次，每次摇床慢摇5分钟，弃溶液。

五. 染色：

将凝胶转移至预先加入 25 mL 糖蛋白染色试剂的容器中，摇床缓慢振荡 15 min。糖蛋白条带通常在 5–10 min 内逐渐呈现品红色；对于糖基化程度较低或样品量较少的糖蛋白，可适当延长显色时间。条带染色清晰后，弃去染色液。

注：尽量避免将糖蛋白染色试剂直接倾倒在凝胶表面，以免局部反应过强，造成凝胶背景颜色不均匀。若糖蛋白染色试剂中有晶体析出，取上清液使用即可，请勿加热溶解晶体。染色过程中可能产生刺激性气味，请在通风橱中操作。

六. 还原：

凝胶中加入 25 mL 还原试剂，摇床缓慢振荡 15 min，以去除残余染色试剂并降低非特异性背景，弃去还原试剂。此时凝胶背景可能仍略带红色。

七. 漂洗：

加入50 mL 3%醋酸溶液摇床慢摇洗涤胶块3次，每次10分钟，直至胶背景红色变浅，接近淡红色或无色，此时红色糖蛋白主带清晰可见。

八. 保存：

胶块保存在50 mL 3%醋酸溶液中。

● NC膜染色操作步骤（请在通风橱中进行以下操作）：

一. 预处理：

用20 mL 3%醋酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡10 分钟。

二. 氧化：

将膜转移到10 mL的氧化试剂中，轻轻振荡15 分钟。

三. 漂洗： 用10 mL 3%醋酸溶液洗涤膜3 次，每次轻轻振荡5 分钟。

四. 染色：

将膜转移到10 mL糖蛋白染色试剂中，摇床慢摇15 分钟，糖蛋白会在5-10分钟内显现品红色。若检测的糖蛋白含量较低，适当延长显色时间。弃染色溶液。

注：若糖蛋白染色试剂中有晶体析出，只需取上清液即可，不要加热溶解晶体。染色步骤会产生有刺激性气味气体，请在通风橱中操作。

五. 还原：

将膜转移到10 mL 还原试剂中，摇床慢摇15分钟，弃溶液。此时膜的背景略带红色。

六. 漂洗：

加入10 mL 3%醋酸溶液摇床慢摇洗涤膜3次，每次10分钟，直至胶背景红色变浅，接近淡红色或无色，此时红色糖蛋白主带清晰可见。

注：若 NC 膜检测信号较弱或无明显条带，可同时对转膜后的 PAGE 胶进行糖蛋白染色，以判断目标糖蛋白是否转移充分。部分高分子量或高度糖基化蛋白的转膜效率可能较低。

七. 保存：

膜可以保存在3%醋酸溶液中。

实验示例：

蛋白转到NC膜后糖蛋白染色

使用RTD6501 糖蛋白染色试剂盒发表部分文章列表（13篇）：

1. [IF=8.947] Adhesive property and mechanism of silkworm egg glue protein.

Author: Yutian Lei, Kaiyu Guo, Yan Zhang, Xiaolu Zhang, Lixia Qin, Xin Wang, Hongtao Zhu, Yuanyuan Guo, Wenxin Yang, Benchi Li Qingyou Xia, Ping Zhao, Zhaoming Dong

Journal: Acta Biomaterialia. Volume 134, 15 October 2021, Pages 499-512

Institution： Southwest University

Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1742706121004773

2. [IF=8.2] Conjugation of dual-natural milk-derived proteins with fucoidan to preparecontrollable glycosylation products via dielectric barrier discharge cold plasma.

Author: Shuangshuang Wang, Yi Ding, Zhenquan Huo, Jiaming Li, Jiaqing Song, Weiwen Jian,Qinyi Gao, Minghui Zhang, Lili Zhao, Jing Zhang, Jiaying Zhang, Wupeng Ge.

Journal: International Journal of Biological Macromolecules. 255 (2024) 128035

Institution： Northwest A&F University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.128035 

3. [IF=6.1] Inhibiting Protein Aggregation Using Cellulose Nanocrystal in MALDI-TOF MS Analysis: Improving the Sensitivity and Repeatability of Intact Protein in Pueraria.

Author: Shan L,Huang Y ,Zhang J ,Su Y,Guo Y.

Journal: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 07 Dec 2023, 71(50):20146-20154

Institution：Shanghai Institute of Organic Chemistry, Chinese Academy of Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1021/acs.jafc.3c04650

4. [IF=3.3] Similar construction of spicules and shell plates: Implications for the origin of chiton biomineralization.

Author: Haipeng Liu, Chuang Liu, Wenjing Zhang, Yang Yuan, Zhenglu Wang, Jingliang Huang

Journal: Journal of Proteomics 296 (2024) 105126

Institution：Hohai University，Sichuan University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jprot.2024.105126  

5. [2023 IF=4.8] Regulatory effects of yam (Dioscorea opposita Thunb.) glycoprotein on energy metabolism in C2C12 and 3T3-L1 cells and on crosstalk between these two cells.

Author: Weiye Li, Jian Shi, Xueping Wu, Hongyong Qiu, Chunhong Liu

Journal: Journal of Ethnopharmacology 338 (2025) 119013

Institution：College of Food Science, South China Agricultural University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jep.2024.119013

6. [2023 IF=4] Achieving thermostability of a phytase with resistance up to 100 ℃.

Author: Tao Tu, Qian Wang, Ruyue Dong, Xiaoqing Liu, Leena Penttinen, Nina Hakulinen, Jian Tian, Wei Zhang，Yaru Wang, Huiying Luo, Bin Yao, and Huoqing Huang

Journal: J. Biol. Chem. (2024) 300(12) 107992

Institution：State Key Laboratory of Animal Nutrition and Feeding, Institute of Animal Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jbc.2024.107992

7. [2023 IF=6.1]  Neuronal CDK5RAP3 de?ciency leads to encephalo-dysplasia via upregulation of N-glycosylases and glycogen deposition.

Author: Fanghui Chen, Minghui Xiang, Zhipeng Wang, Fan Yang, Junzhi Zhou, Zihan Deng, Susu Wang, Ping Li, Jieqi Tew, Wei Zhang,Honglin Li, Yong Teng, Xiaobin Zhu，Yafei Cai

Journal: Cell Death Discovery (2025)11:146

Institution：College of Animal Science and Technology, Nanjing Agricultural University

Paper link：https://doi.org/10.1038/s41420-025-02414-y

8. [2026 IF=8.8] Protein structural changes and characteristic intermediate accumulations in dried abalone driven by the Maillard reaction.

Author: Jiamin Li, Xinhong Zheng, Linfan Shi, Zhongyang Ren, Yuan Zhao, Wuyin Weng , Haize Mei, Xiaoming Jiang

Journal: Food Research International Date: 1 October 2026 Article: 119786 Volume: Volume 241

Institution：College of Ocean Food and Biological Engineering, Jimei University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.foodres.2026.119786

9. [2026 IF=8.7] Dual localization of PDI5 couples endoplasmic reticulum proteostasis to meristem organization and meiotic fidelity in Arabidopsis.

Author: Mohammad Aslam, Beenish Fakher, Bello Hassan Jakada, Yuan Qin，Hanyang Cai

Journal: New Phytologist (2026) 252: 628–646

Institution：College of Life Sciences，Fujian Agriculture and Forestry University

Paper link：https://doi.org/10.1111/nph.71522

10. [2026 IF=4.5] Heterologous expression, immunogenic evaluation, and subunit vaccine potential of the σC protein from the Xinjiang avian reovirus (ARV) strain xj-1.1.

Author: Weiqi Li, Yayin Qi, Xin Ma, Lin Yang, Xinyu Dang, Zhipeng Zuo, Xin Zheng,Yuxin Zhang, Yongjie Wang , Shilei Zhang

Journal: Poultry Science Accepted 12 March 2026

Institution：College of Animal Science and Technology, Shihezi University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.psj.2026.106779

11. [2026 IF=8.7] Deglycosylation of shrimp tropomyosin modulates allergic reactions via immuoregulation and intestinal microbiota

Author: Fan Sun, Ziye Zhang, Lichun Liu, Fatih Ozogul, Zhenxing Li, Hong Lin

Journal: International Journal of Biological Macromolecules 318 (2025) 145258

Institution：College of Food Science and Engineering, Ocean University of China

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2025.145258

12. [2026 IF=28.4] Targeting MAN1B1 potently enhances bladder cancer antitumor immunity via deglycosylation of CD47.

Author: Jie Zhang, Chen Zhang, Ruichen Zang, Weiwu Chen, Yining Guo, Haofei Jiang, Jing Le, Kunyu Wang, Haobo Fan, Xudong Wang, Sisi Mo, Peng Gao, Wenhao Guo, Xinrong Jiang, Fengbin Gao, Junming Jiang, Juyan Zheng, Yuxing Chen, Yicheng Chen, Yanlan Yu, Guoqing Ding.

Journal: Cancer Communications. 2025;45:1090–1112

Institution：School of Medicine, Zhejiang University

Paper link：https://doi.org/10.1002/cac2.70040

13. [2026 IF=4.1] Different N-Glycosylation Sites Reduce the Activity of Recombinant DSPAα2.

Author: Huakang Peng, Mengqi Wang, Nan Wang, Caifeng Yang, Wenfang Guo, Gangqiang Li, Sumei Huang, Di Wei, Dehu Liu.

Journal: Curr. Issues Mol. Biol. 2022, 44,3930–3947.

Institution：Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences

Paper link：https://doi.org/ 10.3390/cimb44090270