糖蛋白染色试剂盒

● 产品简介：                                                

本产品用于PAGE 凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上糖蛋白的检测。整个染色2.5小时完成。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。该试剂盒检测的灵敏度一般可以达到微克级别，但实际灵敏度跟靶蛋白糖基化程度相关，可以用于 SDS-PAGE 和2D电泳的凝胶检测，也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测（但背景较高），还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。

按照每次使用25 ml糖蛋白染色试剂计算，本产品可以染色 8-10块mini-PAGE（8×10cm）胶或印迹膜。

● 产品组成：

● 储存条件

按照标签温度贮存，常温运输。开封后一年有效。

●实验前准备：

1. 配制 3%醋酸溶液：将 15 ml 自备的冰醋酸与 485 ml 超纯水混匀，常温保存备用。

2. 配制 50%甲醇溶液：将 250 ml 甲醇与 250 ml 超纯水混匀，常温保存备用。

3. 配制氧化试剂溶液： 将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250ml空塑料瓶中， 然后加入250 ml的超纯水，充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，常温保存备用。

4. 配制还原试剂溶液： 将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的 250ml 空塑料瓶中，然后加入 250 ml的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，常温保存备用。

5. 配制1×SDS-PAGE上样缓冲液：取0.4 ml 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液，加入1.6 ml超纯水，-20℃贮存备用。

6. 配制阳性对照（辣根过氧化物酶）溶液：向装有 1 mg 辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上样缓冲液，所得辣根过氧化物酶溶液的浓度即为 1mg/ml，然后适量分装成8-10管， 留下一管当天使用， 其余的放-20℃长期保存。 对于 8×10 cm的凝胶来说，每条泳道加 10 μl 的阳性对照溶液即可，上样前95℃处理5分钟。

7. 配制阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）溶液：向装有 1 mg 大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上样缓冲液（自备），所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度即为 1 mg/ml，然后适量分装成8-10管， 留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于 8×10 cm的凝胶来说，每条泳道加 10 μl 的阳性对照溶液即可，上样前95℃处理5分钟。

8. 样品稀释：用 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液将样品浓度稀释为 1 mg/ml，SDS-PAGE 上样缓冲液终浓度为 1×。对于 8×10 cm的凝胶来说，每条泳道加 5-10 μl 的样品即可，上样前95℃处理5分钟。。

● 凝胶染色的操作步骤（膜染色从步骤3开始）：

注意事项：

1.以下步骤仅针对0.75mm厚度大小8×10cm的凝胶，1-1.5mm厚度凝胶或更大体积凝胶适当增加液体体积并延长操作时间。

2. 请在通风橱中进行以下操作。

一. 固定：

取出电泳后的 SDS-PAGE 凝胶，在50 ml 50%甲醇溶液中，摇床慢摇30分钟，弃甲醇溶液。

二. 漂洗：

50 ml超纯水洗涤凝胶两次，每次摇床慢摇10分钟，弃超纯水。

三. 氧化：

凝胶中加入 25 ml 氧化试剂，摇床慢摇15分钟，弃溶液。

四. 漂洗：

50 ml超纯水洗涤凝胶3次，每次摇床慢摇5分钟，弃溶液。

五. 染色：

凝胶中加入25 ml糖蛋白染色试剂，摇床慢摇15 分钟，糖蛋白会在5-10分钟内显现品红色。若检测的糖蛋白含量较低，适当延长显色时间。弃染色溶液。

注：若糖蛋白染色试剂中有晶体析出，只需取上清液即可，不要加热溶解晶体。

染色步骤会产生有刺激性气味气体，请在通风橱中操作。

六. 还原：

凝胶中加入 25 ml 还原试剂，摇床慢摇15分钟，弃溶液。此时凝胶背景略带红色。

七. 漂洗：

加入50 ml 3%醋酸溶液摇床慢摇洗涤胶块3次，每次10分钟，直至胶背景红色变浅，接近淡红色或无色，此时红色糖蛋白主带清晰可见。

八. 保存：

胶块保存在50 ml 3%醋酸溶液中。

● 实验记录表格

实验日期：

实验示例：

蛋白转到NC膜后糖蛋白染色

使用糖蛋白染色试剂盒发表部分文章列表：

1. [IF=8.947] Adhesive property and mechanism of silkworm egg glue protein.

Author: Yutian Lei, Kaiyu Guo, Yan Zhang, Xiaolu Zhang, Lixia Qin, Xin Wang, Hongtao Zhu, Yuanyuan Guo, Wenxin Yang, Benchi Li Qingyou Xia, Ping Zhao, Zhaoming Dong

Journal: Acta Biomaterialia. Volume 134, 15 October 2021, Pages 499-512

Institution： Southwest University

Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1742706121004773

2. [IF=8.2] Conjugation of dual-natural milk-derived proteins with fucoidan to preparecontrollable glycosylation products via dielectric barrier discharge cold plasma.

Author: Shuangshuang Wang, Yi Ding, Zhenquan Huo, Jiaming Li, Jiaqing Song, Weiwen Jian,Qinyi Gao, Minghui Zhang, Lili Zhao, Jing Zhang, Jiaying Zhang, Wupeng Ge.

Journal: International Journal of Biological Macromolecules. 255 (2024) 128035

Institution： Northwest A&F University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.128035 

3. [IF=6.1] Inhibiting Protein Aggregation Using Cellulose Nanocrystal in MALDI-TOF MS Analysis: Improving the Sensitivity and Repeatability of Intact Protein in Pueraria.

Author: Shan L,Huang Y ,Zhang J ,Su Y,Guo Y.

Journal: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 07 Dec 2023, 71(50):20146-20154

Institution：Shanghai Institute of Organic Chemistry, Chinese Academy of Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1021/acs.jafc.3c04650

4. [IF=3.3] Similar construction of spicules and shell plates: Implications for the origin of chiton biomineralization.

Author: Haipeng Liu, Chuang Liu, Wenjing Zhang, Yang Yuan, Zhenglu Wang, Jingliang Huang

Journal: Journal of Proteomics 296 (2024) 105126

Institution：Hohai University，Sichuan University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jprot.2024.105126