三色预染宽分子量蛋白Marker（Phos-tag专用） Ver.760866-1.0
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货号
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名称
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规格
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RTD6166
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三色预染宽分子量蛋白Marker（Phos-tag专用）
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20次（100 μl）
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● 储存、运输及效期：
-20℃保存；湿冰运输；有效期1年。
● 贮存缓冲液：
62.5 mM Tris, pH7.5, 2 % (w/v) SDS, 33 %
(w/v) Glycerol, 5 mM DTT。
● 产品简介：
本产品包含10种纯化的预染蛋白质组成，分子量范围为10-180
kD，其中70
kD条带为红色，10
kD条带为绿色，其余条带为蓝色，可以用于SDS-PAGE和Western Blot转膜时确定未知蛋白的分子量。由于常规预染Marker在Phos-tag凝胶电泳中会出现弯曲的现象，该产品经过特殊处理，可有效改善预染
Marker条带的变形弯曲。Phos-tag是一种能与磷酸分子特异性结合的双核金属络合物，用于分离和检测磷酸化蛋白。在常规SDS-PAGE凝胶中加入Phos-tag 和二价金属离子(Mn2+或 Zn2+)即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。 在电泳时，固定在凝胶上的
Phos-tag 复合物可以特异性结合磷酸化蛋白，使得磷酸化蛋白电泳迁移率降低，从而实现磷酸化和非磷酸化蛋白的分离。
注： 在
Phos-tag SDS-PAGE 中，蛋白质分子的迁移率不仅与分子量大小有关，
与蛋白的磷酸化水平也是密切相关的。本产品不能作为蛋白质分子量大小的准确参考， 仅在电泳和转膜过程中起到指示作用。
以每次上样5 μl计算，该产品可以使用10次。
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技术规格
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条带数量
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7条
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浓度
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0.1-0.3 μg/μl
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上样前处理
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溶化后直接上样，不要加热处理
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推荐凝胶体系
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Zn-Phos-tag（Bis-Tris）或Mn-Phos-tag（Tris-Gly）
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推荐上样体积
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3-5 μl（1 mm厚度10齿梳子）
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推荐染色方法
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预染Marker，电泳过程中即可见条带；
电泳结束后可以考马斯亮蓝染色
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不适用于非变性电泳
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为变性Marker，不适用于非变性电泳
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● 使用说明：
1. 第一次收到该产品，常温溶化彻底混匀，离心快甩10秒将溶液完全收集到管底，-20℃贮存；
2. 使用该产品时，常温解冻后轻轻混匀后既能使用，不能95℃加热处理。
● 实验示例：
1. 染色结果：
三色预染宽分子量蛋白Marker（Phos-tag专用）（RTD6166）电泳染色结果
凝胶：8%Zn-Phos-tag Bis-Tris SDS-PAGE（含50μM Phos-tag，100μM Zn2+）
样品：Phos-tag磷酸化检测阳性对照（PT0120），RC1和RC2各上样5μl
三色预染宽分子量蛋白Marker（10-180kD）（RTD6108） 上样5μl
三色预染宽分子量蛋白Marker（Phos-tag专用）（RTD6166）上样5μl
电泳：1×Tris-MOPS-SDS电泳缓冲液（Phos-tag专用）（TM1270），加抗氧化剂（TA1510）
稳压 80 V 7min随后150V 48min,合计电泳时间5min
染色：FastBlue蛋白染色液（RTD6202）染色30min
结果：RTD6166带更加平直，不会过度弯曲
2. 转膜结果：
三色预染宽分子量蛋白Marker（Phos-tag专用）（RTD6166）转膜结果
凝胶：8%Zn-Phos-tag Bis-Tris SDS-PAGE（含50μM Phos-tag，100μM Zn2+）
样品：Jurkat总蛋白，IP细胞裂解液提取，上样7和14μg
三色预染宽分子量蛋白Marker（10-180kD）（RTD6108） 上样5μl
三色预染宽分子量蛋白Marker（Phos-tag专用）（RTD6166）上样5μl
电泳：1×Tris-MOPS-SDS电泳缓冲液（Phos-tag专用）（TM1270），加抗氧化剂（TA1510）
稳压 80 V 7min随后150V 48min,合计电泳时间5min
漂洗：凝胶用含10mM EDTA的转膜缓冲液漂洗3次，每次10min
转膜：0.45μm NC膜，1×e-blot转膜缓冲液（含20%乙醇） 恒流800mA 20min
封闭：3%BSA 常温封闭一小时
一抗：4E-BP1抗体1：1000稀释，四度过夜
二抗：羊抗兔IgG-HRP 1：5000 常温一小时
检测：RealECL发光检测（EC2520），曝光1秒
结果：RTD6166带更加平直，不会过度弯曲