RealPAGE 3-8% Tris-醋酸预制胶
● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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RTD6154-0308
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RealPAGE
3-8% Tris-醋酸预制胶
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10板/盒
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4-8℃
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说明书
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一份
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-
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● 产品简介：
Tris-醋酸-SDS-PAGE凝胶电泳适合于分离高分子量蛋白，可以有效分离50-500 kD范围内蛋白；电泳体系呈中性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫键在凝胶中交联；在变性还原电泳中，电泳缓冲体系中加入抗氧化剂，整个电泳过程都在还原条件下进行，有效防止二硫键的形成。
RealPAGE 3-8% Tris-醋酸预制胶为梯度凝胶，浓度为3-8%，厚度为1.1 mm，12齿，每个泳道可以上样最大30 μl样品。另外，本公司也提供Tris-醋酸-SDS-PAGE电泳试剂盒（货号：RTD6155）包含预制胶、蛋白上样、蛋白电泳、染色及转膜所需的全部试剂。
● 贮存及运输：
按照标签温度贮存；试剂盒常温运输。
● 使用说明：
1. 实验准备：
1.1 20×样品还原剂为干粉，4℃贮存。用前加入1ml超纯水震荡彻底溶解后使用，已经溶解的20×样品还原剂-20℃贮存。
1.2 400×抗氧化剂为干粉，常温贮存。用前加入15 ml超纯水震荡彻底溶解后使用，已经溶解的400×抗氧化剂-20℃贮存。
2. 电泳：
注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（如图）。
六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。
不兼容Thermol系列电泳槽。
2.2 准备1×电泳缓冲液：
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总体积
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1000
ml
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10×Tris-醋酸-SDS电泳缓冲液
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100 ml
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超纯水
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900 ml
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2.2.1 外槽缓冲液：取适量体积1×电泳缓冲液用于外槽缓冲液。
2.2.2 内槽缓冲液：对于还原样品电泳，200 ml 1×电泳缓冲液中加0.5 ml 400×抗氧化剂，混合均匀后用于内槽缓冲液。对于非还原样品电泳，直接在内槽中加入1×电泳缓冲液，不要添加400×抗氧化剂。
2.3准备上样样品：
注：表格以配制10 μl样品为例，其他体积按照比例调整。
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总体积10 μl
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组份
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非还原样品
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还原样品
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蛋白样品
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x μl
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x μl
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5×MonoClolor蛋白上样缓冲液 (变性，非还原)
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2 μl
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2 μl
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20×样品还原剂
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-
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0.5 μl
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超纯水
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补至10 μl
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95℃ 10分钟
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2.4电泳过程；
在电泳槽的内槽内加入1×电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，用1ml吸头冲洗加样孔3次；随后在电泳槽外槽加入适量的1×电泳缓冲液。上样，电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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150V
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40-55 mA/板胶
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25-40 mA/板胶
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60+min
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注：冰浴电泳（可选）
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3. 染色：
3.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），摇床常温摇动，条带5-10分钟即可见（蛋白含量高于1
μg条带）。
3.2 摇床常温继续摇动15-30分钟至条带清晰可见。
3.3 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1-2次蒸馏水，摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。
3.4 观察保存结果。
4. 转膜：
4.1 转印膜选择：
Tris-醋酸凝胶转膜可以使用NC膜和PVDF膜，需要选择0.45 μm孔径。PVDF膜使用前注意需要用甲醇润湿活化。
4.2 10×Tris-醋酸转膜缓冲液（溶液型）配制：
将10×Tris-醋酸转膜缓冲液（湿转，粉末型）粉末溶解于500 ml超纯水中，即配成500 ml 10×Tris-醋酸转膜缓冲液（溶液型），不要调节pH，pH~7.2。
4.3 准备1×转膜缓冲液：
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1×即用型转膜缓冲液 配制量 1升
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10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型)
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100
ml
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变性蛋白
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非变性蛋白
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＜20 kD蛋白
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无水甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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＞80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超纯水
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定容至1升，不要调节pH，pH~7.2
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注：甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在膜上，而SDS让蛋白更加离开膜。因此对大蛋白转膜来说，多加SDS，少加甲醇；而对小蛋白转膜，多加甲醇，少加SDS。
4.4 转膜条件：
以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。
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膜孔径
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蛋白大小
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稳流
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建议时间
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降温措施
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分钟
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分钟
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分钟
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需要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小时
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需要
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