非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号:RTD6130）
Native PAGE Gel
Preparation and Electrophoresis Kit
● 产品组成：
|
货号
|
名称
|
规格
|
保存条件
|
|
AC2913-01
|
30%PAA(29:1)
|
100 ml
|
4℃
|
|
RTD6130-02
|
4×分离胶缓冲液 pH8.8
|
100 ml
|
RT
|
|
RTD6130-03
|
4×浓缩胶缓冲液 pH6.8
|
50 ml
|
RT
|
|
AP020P
|
APS（干粉）
|
0.5 g
|
RT
|
|
TA0761-01
|
TEMED
|
0.5 ml
|
4℃，避光
|
|
PL111
|
5×非变性非还原蛋白上样缓冲液
|
1 ml
|
-20℃
|
|
TG130P
|
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉）
|
1L
|
RT
|
● 产品简介：
本公司提供的非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制30-50块常规大小的非变性PAGE胶。
特别说明：由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统，分离胶pH为8.8，因此要求待分离的蛋白等电点pI≤7.0，这样蛋白在凝胶系统内带负电荷，在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI＞7.0，请选择碱性电泳凝胶系统分离（货号RTD6131）。
● 使用说明：
一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二）
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制非变性PAGE的分离胶(即下层胶)。
表一 不同浓度的PAGE分离胶的最佳分离范围：
|
SDS-PAGE分离胶浓度
|
最佳分离范围
|
|
6%
|
50-150kD
|
|
8%
|
30-90kD
|
|
10%
|
20-80kD
|
|
12%
|
12-60kD
|
|
15%
|
10-40kD
|
10% APS配制-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
制备分离胶步骤：
1．根据下表，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡
2．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
3．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二 浓缩胶制备：
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表一将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
三 电泳：
凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（不含SDS）的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
实验示例
非变性蛋白电泳相关产品发表文章
1. [2021
IF=3.74] Cloning, expression, and function of
ferritins in the tick Haemaphysalis flava.
Product: RTD6142
高分子量非变性电泳蛋白质Marker
II（45-669
kD）
Author: Yu Zhao, Lei Liu,
Jin-Bao Liu, Cong-Ying Wu, De-Yong Duan, Tian-Yin Cheng
Journal: Ticks
and Tick-borne Diseases. Volume 13, Issue 2, March 2022, 101892
Institution：College of Veterinary Medicine, Hunan
Agricultural University,
Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1877959X21002454
2. [2021 IF=6.95] Characterizing
of a new α-agarase AgaE from Thalassomonas sp. LD5 and probing its
catalytically essential residues.
Product: RTD6142
高分子量非变性电泳蛋白质Marker
II（45-669
kD）
Author: Jingnan
Xua, Zibo Cuia, Weibin Zhanga, Jingxuan Lua, Xinzhi Lua, Wengong Yu.
Journal: International
Journal of Biological Macromolecules. Vol
194,2022,50-57.
Institution： School
of Medicine and Pharmacy, Ocean University of China
Paper
link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.11.194
3. [2021 IF=6.95] A
teleost interleukin-16 is implicated in peripheral blood leukocytes recruitment
and anti-bacterial immunity.
Product: RTD6130 非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
Author:Xue-peng Li, Guan-yu Chen, Jian Zhang, Deng-lai Li, Ji-xing Feng.
Journal: International Journal of Biological
Macromolecules. 2021,Vol.187, 821-829.
Institution： School of Ocean, Yantai University, Yantai, China
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.07.151
4. [IF=17.69
2021] Turn air-captured CO2 with methanol into amino acid and pyruvate
in an ATP/NAD(P)H- free chemoenzymatic system.
Product: RTD6130 非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒; PL111 5×非变性非还原蛋白上样缓冲液; RTD6142 高分子量非变性电泳蛋白质Marker II（45-669 kD）
Author: Jianming Liu, Han Zhang, Yingying Xu, HaoMeng, An-Ping Zeng.
Journal: Nature
Communications. 2023，14:2772.
Institution： Westlake University
Paper link： http://www.nature.com/articles/s41467-023-38490-w