宽分子量非变性电泳蛋白质Marker III（21-1000 kD）

技术规格
主条带数量	8条
贮存缓冲液	50 mM Tris-HCl pH7.5，15%甘油，稳定剂，溴酚蓝
浓度	0.2-0.4 μg/μl
上样前处理	溶化混匀后直接上样，不要加热处理
推荐凝胶体系	8%或4-15%Tris-甘氨酸非变性凝胶
推荐上样体积	5 μl（1mm厚度10齿梳子）
推荐染色方法	非预染Marker，电泳时不可见条带，电泳后需要考马斯亮蓝染色可以观察条带
不适用于变性电泳	为非变性Marker，不适用于变性电泳

● 产品简介：

本产品有5种蛋白组成，分子量范围为21-1000 kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到8条主带。

蛋白名称	分子量(kD)	蛋白来源	pI	说明
PR1	~1000	equine	N/A	非变性下约1000 kD
Ferritin	~440 ~880	equine spleen	N/A	非变性下440 kD，880 kD
RC2	~200	重组蛋白	6.7	单体蛋白分子量为75 kD，在Tris-甘氨酸非变性下表现为分子量~200 kD
RC1	~66 ~132	重组蛋白	4.7	单体蛋白分子量为~66 kD，在Tris-甘氨酸非变性下表现为单体（分子量~66 kD）和二聚体（分子量~132 kD）
Ovalbumin	~45	egg white	5.2	球蛋白，分子量为45 kD，非变性条件下大于45 kD会出现电荷异构体（charge isomer，分子量~50 kD）
Trypsin Inhibitor	~21	Soybean	4.5	非变性下分子量~21 kD

● 使用说明：

1. 取出产品后，常温溶化后，彻底混匀，上样电泳。

注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，1.0厚度10齿梳子加样孔上样5 μl，1.0厚度15齿梳子加样孔上样量2.5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。

2. 该产品不含蛋白凝胶制备试剂，您可以选择非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号：

RTD6130或RTD6135）。如自备试剂，经典Laemmli系统中把制胶溶液、电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂（DTT或β-巯基乙醇）全部去除即可进行非变性电泳。

3. 电泳条件：

建议使用8%，10%非变性胶或者4-15%梯度非变性胶（货号：RTD6117-0415）进行电泳。

恒电压	120 V
起始电流	27-35 mA/板胶
结束电流	7-10 mA/板胶
电泳时间	50-60 min

4. 电泳结束后，考马斯亮蓝染色，观察结果。

注：使用银染染色时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，需要适当降低Marker上样量，一般稀释50倍后上样。

● 注意事项：

1. 该产品仅适用于酸性蛋白非变性电泳，不适用于变性电泳和碱性蛋白非变性电泳。非变性蛋白电泳条件下，不能精确判断蛋白的分子量大小，更多是作为相对参照。因为在非变性条件下，蛋白的电荷，空间结构，物化性质等都对蛋白的迁移有影响，所以非变性电泳的蛋白分子量需谨慎解读并结合其他方法（如SEC-HPLC）验证。

2. 非变性蛋白电泳Marker由于要保持蛋白的天然结构，都没有偶联染料，在电泳时基本都看不到条带；但是RTD6104中的440 kD由于天然蛋白中含有铁离子，使得电泳后在胶上可见淡黄色，凝胶转膜后，膜上也可以看到黄色的440 kDa条带，可以大体判断Marker转膜的效果。

3. 非变性蛋白Marker转膜后可以用丽春红染色液（货号：RTD6301）染膜，可以看到Marker条带，顺便可以检测转膜效率，然而要注意的是丽春红染色灵敏度比较低，可能不能完全看到完整的Marker条带。

4. 推荐使用8%（货号：RTD6130），4-15%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（货号：RTD6135）或者3-12%和4-16% RealPAGE Native BN/CN预制胶（货号：RTD6139）。其他浓度并非不适用，因为非变性蛋白Marker迁移率不仅受分子量影响，还受其他因素影响，所以在不同浓度的凝胶中，分子量标记的迁移位置会变化，主带的电荷异构体的表观分子量也会变化。

实验示例：

1 4-15%Tris-甘氨酸非变性

2 4-16% Blue Native gel

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