Phos-tag磷酸化检测阳性对照 Ver.760774-1.0
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货号
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名称
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规格
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PT0120
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Phos-tag磷酸化检测阳性对照
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20次
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● 产品组成：
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组份
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名称
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浓度
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规格
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PT0120-01
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RC1蛋白（磷酸化）
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1 μg/μl
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100 μl
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PT0120-02
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RC2（部分磷酸化）
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1 μg/μl
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100 μl
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● 产品介绍：
Phos-tag磷酸化检测阳性对照是一种用于验证Phos-tag SDS-PAGE电泳体系及Western
Blot磷酸化检测流程有效性的标准化蛋白对照。本产品由具有明确磷酸化状态差异的蛋白组分组成，可在Phos-tag凝胶中产生不同迁移速率的蛋白条带，用于确认Phos-tag凝胶对磷酸化蛋白的捕获和迁移分离能力。与普通SDS-PAGE相比，Phos-tag SDS-PAGE能够根据蛋白结合磷酸基团的数量及状态产生迁移差异，使未磷酸化和磷酸化蛋白表现为不同迁移位置，从而实现蛋白磷酸化状态的可视化分析。
按照每次上样5
μl计算，该产品可以使用20次。
● 贮存、运输及效期：
-20℃贮存；湿冰运输；有效期一年。
● 使用方法：
1. 取RC1蛋白和RC2蛋白，95度加热5 min， 各取3-5 μl 上样。
建议使用12% Zn-Phos-tag Bis-Tris SDS-PAG或8%Mn-Phos-tag Tris-Glycine SDS-PAG凝胶。
2. 电泳结束后，考马斯亮蓝染色观察结果。
● 实验示例：
1. Zn-Phos-tag SDS-PAGE检测
12% Zn-Phos-tag SDS-PAGE检测RC1/RC2蛋白磷酸化效果
制备12%Zn-Phos-tag
SDS-PAGE凝胶，同时使用4-20%Bis-Tris SDS-PAGE（RTD6118-0420-11）作为对照；两板同时电泳；电泳条件：1×Tris-MOPS-SDS电泳缓冲液（TM1270P），加抗氧化剂（TA1510）， 70V 10min后调节电压到140V，至溴酚蓝前沿到达凝胶底部，电泳时间共55 min；FastBlue蛋白染色液（RTD6202）染色；RC1为天然磷酸化蛋白，RC2为RC1经λ Protein
Phosphatase部分脱磷酸化处理，包含磷酸化和脱磷酸化蛋白两种形式，在Zn–Phos-tag SDS-PAGE中，RC2分离为两条迁移率不同的条带，其中慢迁移条带对应磷酸化蛋白，快迁移条带对应脱磷酸化蛋白（左图）；而在常规Bis-Tris
SDS-PAGE中，磷酸化和脱磷酸化OA几乎无法区分（右图）。
2. Mn-Phos-tag SDS-PAGE检测
12% Mn-Phos-tag SDS-PAGE检测RC1/RC2蛋白磷酸化效果
制备12%Mn-Phos-tag SDS-PAGE凝胶（50 μM Phos-tag 100 μM 氯化锰），
同时使用12% Tris-Glycine SDS-PAGE（RTD6118-12-15）作为对照；两板同时电泳；
电泳条件：1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液（TG140P），
7两板同时电泳 80V 25min 150V 终26mA 合计81min，至溴酚蓝前沿到达凝胶底部；
FastBlue蛋白染色液（RTD6202）染色；RC1为天然磷酸化蛋白，RC2为RC1经λ Protein Phosphatase
部分脱磷酸化处理，包含磷酸化和脱磷酸化蛋白两种形式，在Mn–Phos-tag SDS-PAGE中，
RC2分离为两条迁移率不同的条带，其中慢迁移条带对应磷酸化蛋白，
快迁移条带对应脱磷酸化蛋白（左图）；而在常规Tris-Glycine SDS-PAGE中，
磷酸化和脱磷酸化OA几乎无法区分（右图）。