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植物脯氨酸检测试剂盒

植物脯氨酸检测试剂盒

产品编号:PP5040

产品规格:50次

数量
价格 ¥400


植物脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)

Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin

产品组成:

组分货号

名称

规格

贮存

PP5040-01

试剂1-Pro裂解液

125 ml

RT

PP5040-02

试剂2-Pro标准液

1 ml

4℃

PP5040-03

试剂3-Pro显色液

50 ml

4 避光

●  产品简介:

脯氨酸(Proline,Pro)是一种环状的α-亚氨基酸,呈中性,等电点为6.30,易溶于水。在正常环境情况下脯氨酸含量较低,但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等),脯氨酸常有明显积累,即积累指数与植物的抗逆性有关。植物脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸与茚三酮共热发生反应,能产生稳定的红色产物,以分光光度计测定处吸光度,在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。

该试剂盒不使用甲苯等有害溶剂,经济环保。

该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量,不适用于动物及医疗样品中脯氨酸的测定。

按照一次使用1 ml Pro显色液计算,试剂盒可以使用50次。

自备材料:

植物根茎、叶子等;剪刀;螺盖离心管或锁盖离心管或96孔板;1ml玻璃比色皿;分光光度计或酶标仪;水浴锅或干浴器;离心机

操作步骤:

1 样本处理:

取新鲜植物组织,清洗干净,擦干,剪碎,迅速称取, 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液(注意是否已经加入无水乙醇)的比例加入Pro裂解液(建议使用1.5ml螺口离心管或锁盖离心管),沸水浴或干浴处理20分钟 (期间间歇混匀),10000 rpm离心 2分钟,上清即为脯氨酸提取液,4℃保存备用。待测提取液如不能及时测定,应置于-20℃保存,1-2天内稳定。

2 配制系列脯氨酸标准溶液:

取1ml 试剂1-Pro裂解液全部加入到试剂2-Pro标准液的小管中,混匀后彻底溶解,即配成的Pro标准液(100mg/ml)。

取1 μl 100mg/ml 标准液加入到1ml Pro裂解液中,即配成100μg/ml Pro标准液待用。参照下表配制1-6号不同浓度的Pro标准溶液。

 

编号

1

2

3

4

5

6

7

8

100μg/ml Pro标准液加入量(ml

0.01

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

0.15

0.2

Pro裂解液(ml

0.49

0.48

0.46

0.44

0.42

0.4

0.35

0.3

脯氨酸含量(μg

1

2

4

6

8

10

15

20

4 样品测定:

= 1 \* GB3 分光光度计测定:参考下表设置反应混合液,依次加入试剂:

编号

0

1-8

9-X

 

空白管

标准管

测定管

试剂1-Pro裂解液

0.5 ml

-

-

步骤1中的脯氨酸提取液

-

-

0.5 ml

Pro标准液(步骤31-8管)

-

0.5 ml

-

试剂3-Pro显色液

1 ml

1 ml

1 ml

③ 水浴煮沸或干浴20分钟,间歇混匀。加热时务必注意避免液体暴沸溅出,可使用锁盖离心管或螺旋盖离心管。

④ 冰浴或流水冷却至室温,10000 rpm离心 2分钟,如发现没有不溶物,也可以不离心。 

⑤ 取上清,用空白管作为对照,取1ml反应混合液用分光光度计测定520nm吸光度值。

= 6 \* GB3 酶标仪测定:参考下表设置反应混合液,依次加入试剂:

 

空白管

标准管

测定管

试剂1-Pro裂解液

50 μl

-

-

步骤1中的脯氨酸提取液

-

-

50 μl

Pro标准液(步骤31-8管)

-

50 μl

-

试剂3-Pro显色液

100 μl

100 μl

100 μl

 5 计算:

以系列脯氨酸标准(1-8号管)含量(μg)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,制作标准曲线,根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸含量。

如使用分光光度计测定,根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量:

植物组织样品脯氨酸含量(μg/g)=1.5(C×VT)/(W×VS) =3C/W


VT=步骤1中脯氨酸提取液总体积(ml),此处为1ml

W=步骤1中使用的样品鲜重(g)

VS=步骤4中测定时加入的脯氨酸提取液体积(ml),本实验为0.5ml

1.5系数为步骤4中反应混合液体积为1.5ml,取1ml测定吸光值



 
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