10×RealBlotTM 快速转膜液
10×RealBlotTM Rapid Transfer
buffer
● 产品组成:
货号
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名称
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规格
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保存条件
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RT5020
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10×RealBlotTM快速转膜液
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500 ml
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RT
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说明书
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一份
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● 产品简介:
快速转膜液使用独特配方,能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF或硝纤膜)上。使用湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)方法,能在15-35分钟内完成转膜过程。
快速和环保:快速转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。
兼容性好:快速转膜液能兼容Laemmli胶,预制胶,Bis-Tris胶等多种凝胶。
转移效率高:快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。
● 贮存:
4-8℃贮存,有效期一年。
● 使用说明:
转膜前的准备:
5-6张裁好的滤纸;裁好的转印膜;足够的1×快速转移buffer
一 湿转法(Tank blot):
1 按照下表配制1×快速转膜液
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1×快速转膜液配制量
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100 ml
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500 ml
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1000 ml
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10×快速转膜液
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10 ml
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50 ml
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100 ml
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无水乙醇
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20 ml
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100 ml
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200 ml
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超纯水
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70 ml
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350 ml
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700 ml
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2 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿。
3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)
一块海绵
2mm滤纸
凝胶
转印膜
1mm滤纸
一块海绵(根据三明治的厚度选择是否使用)
正极(阳极)
注意: ① 要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
② PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
③ 三明治结构的制作不能太紧,也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话,可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。
5 将三明治结构放于转移槽中。
注:转移槽中可以不用1×快速转膜液,可以用1×TGS(Tris-Glycine-SDS)电泳缓冲液取代。三明治结构中的快速转膜液足够保证转膜的完成。
二 半干转(Semi-dry blot):
1 按照下表配制1×快速转膜液:
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1×快速转膜液配制量
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100 ml
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500 ml
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1000 ml
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10×快速转膜液
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10 ml
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50 ml
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100 ml
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无水乙醇
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20 ml
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100 ml
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200 ml
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超纯水
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70 ml
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350 ml
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700 ml
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2 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿。
3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)
下层滤纸
凝胶
转印膜
上层滤纸
正极(阳极)
半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触;滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。
注意:PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
三 转移条件:
推荐使用恒流转移
电流
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转移时间
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300 mA
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30 to 35 min
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330 mA
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25 to 30 min
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350 mA
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25 to 30 min
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375 mA
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20 to 25 min
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400 mA
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15 to 20 min
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