10×RealBlot 快速转膜液

10×RealBlot Rapid Transfer buffer

● 产品组成：

● 产品简介：

快速转膜液使用独特配方，能高效快速地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。使用湿转法（Tank blot）或半干转法（Semi-dry blot）方法，能在15-35分钟内完成转膜过程。

快速和环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。

兼容性好：快速转膜液能兼容Laemmli胶，预制胶，Bis-Tris胶等多种凝胶。

转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。

● 贮存：

  4-8℃贮存，有效期一年。

● 使用说明：

转膜前的准备：

5-6张裁好的滤纸；裁好的转印膜；足够的1×快速转移buffer

一 湿转法（Tank blot）：

1 按照下表配制1×快速转膜液

2 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。

3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。

注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

4 按照以下顺序做好转印三明治结构：

负极（阴极）

一块海绵

2mm滤纸

凝胶

转印膜

1mm滤纸

一块海绵（根据三明治的厚度选择是否使用）

正极（阳极）

注意：  ① 要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。

 ② PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

 ③ 三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话，可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。

5 将三明治结构放于转移槽中。

注：转移槽中可以不用1×快速转膜液，可以用1×TGS（Tris-Glycine-SDS）电泳缓冲液取代。三明治结构中的快速转膜液足够保证转膜的完成。

二 半干转（Semi-dry blot）：

1 按照下表配制1×快速转膜液：

2 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。

3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。

注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

4 按照以下顺序做好转印三明治结构：

负极（阴极）

下层滤纸

凝胶

转印膜

上层滤纸

正极（阳极）

半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。

注意：PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

三 转移条件：

推荐使用恒流转移

电流	转移时间
300 mA	30 to 35 min
330 mA	25 to 30 min
350 mA	25 to 30 min
375 mA	20 to 25 min
400 mA	15 to 20 min

实验示例：