10×RealBlotTM 快速转膜液
10×RealBlotTM Rapid Transfer
buffer
● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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保存条件
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RT5020
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10×RealBlotTM快速转膜液
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500 ml
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RT
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说明书
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一份
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● 产品简介：
快速转膜液使用独特配方，能高效快速地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。使用湿转法（Tank blot）或半干转法（Semi-dry blot）方法，能在15-35分钟内完成转膜过程。
快速和环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。
兼容性好：快速转膜液能兼容Laemmli胶，预制胶，Bis-Tris胶等多种凝胶。
转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。
● 贮存：
4-8℃贮存，有效期一年。
● 使用说明：
转膜前的准备：
5-6张裁好的滤纸；裁好的转印膜；足够的1×快速转移buffer
一 湿转法（Tank blot）：
1 按照下表配制1×快速转膜液
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1×快速转膜液配制量
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100 ml
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500 ml
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1000 ml
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10×快速转膜液
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10 ml
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50 ml
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100 ml
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无水乙醇
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20 ml
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100 ml
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200 ml
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超纯水
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70 ml
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350 ml
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700 ml
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2 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。
3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4 按照以下顺序做好转印三明治结构：
负极（阴极）
一块海绵
2mm滤纸
凝胶
转印膜
1mm滤纸
一块海绵（根据三明治的厚度选择是否使用）
正极（阳极）
注意： ① 要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
② PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
③ 三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话，可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。
5 将三明治结构放于转移槽中。
注：转移槽中可以不用1×快速转膜液，可以用1×TGS（Tris-Glycine-SDS）电泳缓冲液取代。三明治结构中的快速转膜液足够保证转膜的完成。
二 半干转（Semi-dry blot）：
1 按照下表配制1×快速转膜液：
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1×快速转膜液配制量
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100 ml
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500 ml
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1000 ml
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10×快速转膜液
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10 ml
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50 ml
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100 ml
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无水乙醇
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20 ml
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100 ml
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200 ml
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超纯水
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70 ml
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350 ml
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700 ml
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2 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。
3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4 按照以下顺序做好转印三明治结构：
负极（阴极）
下层滤纸
凝胶
转印膜
上层滤纸
正极（阳极）
半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。
注意：PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
三 转移条件：
推荐使用恒流转移
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电流
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转移时间
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300 mA
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30 to 35 min
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330 mA
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25 to 30 min
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350 mA
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25 to 30 min
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375 mA
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20 to 25 min
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400 mA
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15 to 20 min
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