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RTE4102 DNA尿素PAGE电泳试剂盒
 产品货号: RTE4102
 产品名称: RTE4102 DNA尿素PAGE电泳试剂盒
 产品价格/规格: 60次 600元
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 更新时间: 2021-07-15
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  • TBE-尿素-PAGE电泳可以选择RTM501 单链DNA Marker(25-75 nt)作为分子量标准。 


    DNA尿素PAGE电泳试剂盒(货号RTE4102  

                         DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit

    产品组成: 

    货号

    名称

    规格

    保存条件

    AC2914

    40%PAA(29:1)

    100 ml

    4

    TB001

    5×TBE

    500 ml

    RT

    RU5080

    尿素(电泳级)

    220 g

    RT

    AP020P

    APS(干粉)

    5 ml

    RT (配制后-20贮存)

    TA0761

    TEMED

    0.5 ml

    4,避光

    DL080

    2×TBE尿素上样缓冲液 (尿素变性胶)

    1 ml

    4

    产品简介:

    DNA尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段,理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。

    本公司提供的DNA尿素PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制各种浓度的PAGE胶,使用方便。

    按照每次制备7 ml 8%凝胶(大小10×8cm,1mm厚度)计算,试剂盒可使用至少60次。

    贮存和运输:

        试剂盒按照标签温度贮存,有效期一年。试剂盒常温运输。

    使用说明:

    一、制备凝胶:

    10% APS配制-5 ml

    将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

    1.1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

    1.2.分离胶配制:根据表格一,将不同体积的成分混合,漩涡搅拌至尿素彻底溶解。

    表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml,适用于厚度1.0 mm小板胶)

    单链DNA长度

    最佳凝胶浓度

    尿素(克)

    40%PAA

    29:1

    5×TBE

    补水到总体积

    10%APS

    TEMED

    200-1000 nt

    5%

    2.1

    0.625 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl

    50-400 nt

    8%

    2.1

    1 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl

    30-300 nt

    10%

    2.1

    1.25 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl

    10-150 nt

    15%

    2.1

    1.875 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl


    1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,使凝胶表面保持平整。

    1.4静置10-20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    1.5去除覆盖在分离胶上的水层;按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合;最后加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

    表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml,适用于1.0mm厚度胶)

    各组份体积(ml

    凝胶浓度

    尿素

    40%PAA29:1

    5×TBE

    灭菌水

    10%APS

    TEMED

    4%

    0.84

    0.2 ml

    0.4 ml

    补水至体积2 ml

    20 μl

    2 μl

    1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端;将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    1.7静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    二、电泳:

    2.1. 预电泳:拔出梳子,1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次,去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。

    注:试剂盒配套的5×TBE缓冲液仅够配制凝胶用,1×TBE电泳缓冲液请自己制备,配方如下:

    终浓度

    顺序

    原料

    1

    5

    89 mM

    1

    Tris [MW121.14]

    10.8

    54

    2 mM

    2

    EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]

    0.744

    3.72

    89 MM

    3

    硼酸 [MW61.83]

    5.5

    27.5

     

    4

    超纯水最后定容至

    1

    5

     

     

    最后pH8.2-8.3之间,可以不用调节pH,记录每批pH

    2.2. 取 3-5 μl样品,加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液,70℃处理5 分钟后立即冰浴,上样。

    2.3.  连接电源线,打开电源开关,按照以下条件电泳。

     

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    适用条件

    推荐电压

    200V

    15-20 mA/板胶

    10-15 mA/板胶

    60+ min

    最佳电压,最优的分辨率

    2.4.  等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续实验。

    变性胶浓度

    溴酚蓝

    二甲苯菁

    5%

    35 nt

    130 nt

    8%

    19 nt

    75 nt

    10%

    15 nt

    55 nt

    15%

    10 nt

    52 nt

    三、染色:

    3.1 单链DNA可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5103),核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5102)或核酸快速银染试剂盒(货号:RTS5101)进行染色。




    实验示例:

    1.    使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5103)染色:

                             

     

    2.    使用核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5102)染色:

                      



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